农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2014年
7期
910-915
,共6页
于福先%朱志伟%陈晓宇%黄菁%石铭%滕菲%潘建治
于福先%硃誌偉%陳曉宇%黃菁%石銘%滕菲%潘建治
우복선%주지위%진효우%황정%석명%등비%반건치
原始生殖细胞%分离纯化%密度梯度离心%性腺嵌合体
原始生殖細胞%分離純化%密度梯度離心%性腺嵌閤體
원시생식세포%분리순화%밀도제도리심%성선감합체
Primordial germ cells%Separation and purification%Density gradient centrifugation%Gonadal chimeras
家禽的原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)是形成精子和卵子的前体细胞,可在性成熟的家禽体内生成精子和卵子,因此家禽PGCs可应用于以PGCs为基础的现代保种技术、转基因技术以及家禽的发育生物学等研究领域,具有重要的科研与应用价值.本研究使用Nycodenz密度梯度离心法在孵化至13～15期的鸡(Gallus gallus)胚血液中分离纯化鸡胚的PGCs,经显微注射针分拣后,PGCs的纯度可达99％以上,细胞直径主要集中于13～15 μm;将所分离纯化的PGCs分别通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)染色、高碘酸希夫氏(periodic acid-schiff,PAS)染色及阶段特异性胚胎表面抗原-1 (stagespecific embryonic antigens-1,SSEA-1)免疫化学染色进行鉴定,染色结果均出现PGCs所特有的反应;使用活细胞荧光染料PKH26对分离纯化的PGCs进行标记,成功标记的PGCs在荧光显微镜下可观测到红色荧光,将约200个标记后的PGCs,通过腹主动脉注入孵化至14～16期的受体鸡胚中,在孵化至第8天的鸡胚性腺冷冻切片中,可检测到供体PGCs的存在,这一结果表明,所分离纯化的PGCs可定植于受体鸡胚的性腺中.本研究为以PGCs为基础的种质资源保存研究以及转基因技术研究提供了基础资料.
傢禽的原始生殖細胞(primordial germ cells,PGCs)是形成精子和卵子的前體細胞,可在性成熟的傢禽體內生成精子和卵子,因此傢禽PGCs可應用于以PGCs為基礎的現代保種技術、轉基因技術以及傢禽的髮育生物學等研究領域,具有重要的科研與應用價值.本研究使用Nycodenz密度梯度離心法在孵化至13～15期的鷄(Gallus gallus)胚血液中分離純化鷄胚的PGCs,經顯微註射針分揀後,PGCs的純度可達99％以上,細胞直徑主要集中于13～15 μm;將所分離純化的PGCs分彆通過堿性燐痠酶(alkaline phosphatase,AKP)染色、高碘痠希伕氏(periodic acid-schiff,PAS)染色及階段特異性胚胎錶麵抗原-1 (stagespecific embryonic antigens-1,SSEA-1)免疫化學染色進行鑒定,染色結果均齣現PGCs所特有的反應;使用活細胞熒光染料PKH26對分離純化的PGCs進行標記,成功標記的PGCs在熒光顯微鏡下可觀測到紅色熒光,將約200箇標記後的PGCs,通過腹主動脈註入孵化至14～16期的受體鷄胚中,在孵化至第8天的鷄胚性腺冷凍切片中,可檢測到供體PGCs的存在,這一結果錶明,所分離純化的PGCs可定植于受體鷄胚的性腺中.本研究為以PGCs為基礎的種質資源保存研究以及轉基因技術研究提供瞭基礎資料.
가금적원시생식세포(primordial germ cells,PGCs)시형성정자화란자적전체세포,가재성성숙적가금체내생성정자화란자,인차가금PGCs가응용우이PGCs위기출적현대보충기술、전기인기술이급가금적발육생물학등연구영역,구유중요적과연여응용개치.본연구사용Nycodenz밀도제도리심법재부화지13～15기적계(Gallus gallus)배혈액중분리순화계배적PGCs,경현미주사침분간후,PGCs적순도가체99％이상,세포직경주요집중우13～15 μm;장소분리순화적PGCs분별통과감성린산매(alkaline phosphatase,AKP)염색、고전산희부씨(periodic acid-schiff,PAS)염색급계단특이성배태표면항원-1 (stagespecific embryonic antigens-1,SSEA-1)면역화학염색진행감정,염색결과균출현PGCs소특유적반응;사용활세포형광염료PKH26대분리순화적PGCs진행표기,성공표기적PGCs재형광현미경하가관측도홍색형광,장약200개표기후적PGCs,통과복주동맥주입부화지14～16기적수체계배중,재부화지제8천적계배성선냉동절편중,가검측도공체PGCs적존재,저일결과표명,소분리순화적PGCs가정식우수체계배적성선중.본연구위이PGCs위기출적충질자원보존연구이급전기인기술연구제공료기출자료.
