农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2014年
7期
903-909
,共7页
徐秋勤%张君涛%李小佳%王鸽%曹书郡%张胜军%魏莉莉%高培滨%王新庄
徐鞦勤%張君濤%李小佳%王鴿%曹書郡%張勝軍%魏莉莉%高培濱%王新莊
서추근%장군도%리소가%왕합%조서군%장성군%위리리%고배빈%왕신장
类胚胎干细胞%分离%培养%胚胎处理%兔
類胚胎榦細胞%分離%培養%胚胎處理%兔
류배태간세포%분리%배양%배태처리%토
ES-like cells%Isolation%Cultivation%Embryos treatment%Rabbit
探讨兔(Lepus brachyurus)胚胎的不同处理方法对兔早期胚胎体外发育能力的影响,筛选出适合兔类胚胎干细胞(embryonic stem,ES)分离培养的兔胚胎的较佳处理方法.将兔胚胎用3种不同的方式进行处理,观察兔类ES细胞贴壁、克隆、生长情况,并对所得的兔类ES细胞进行碱性磷酸酶活性鉴定、干细胞转录因子的RT-PCR检测和体外分化能力的鉴定.结果显示,挑破透明带法和胚胎分割法较对照组得到的胚胎更容易贴壁和增殖,差异显著(P<0.05),虽然离散胚组的胚胎贴壁率(88.9%)显著高于挑破透明带组(53.8%)(P<0.05),但挑破透明带组的ICM形成率(48.8%)高于离散胚组(40.0%)(P<0.05),挑破透明带组F1、F2代兔类ES细胞的克隆率分别为35.7%和33.9%,均显著高于其他两组(P<0.05),最高传至30代.获得的兔类ES细胞经碱性磷酸酶染色检测呈阳性.提取兔类ES细胞集落的RNA,经RT-PCR检测,得到扩增多能基因GAPDH、Nanog和Sox2与预期大小一致的目的片段.体外分化形成具有3个胚层构成的类胚体(embryoid bodies,EBs).结果表明,挑破透明带有利于提高从兔胚胎中分离胚胎干细胞的效率,能更好的支持兔类ES细胞的培养与增殖.
探討兔(Lepus brachyurus)胚胎的不同處理方法對兔早期胚胎體外髮育能力的影響,篩選齣適閤兔類胚胎榦細胞(embryonic stem,ES)分離培養的兔胚胎的較佳處理方法.將兔胚胎用3種不同的方式進行處理,觀察兔類ES細胞貼壁、剋隆、生長情況,併對所得的兔類ES細胞進行堿性燐痠酶活性鑒定、榦細胞轉錄因子的RT-PCR檢測和體外分化能力的鑒定.結果顯示,挑破透明帶法和胚胎分割法較對照組得到的胚胎更容易貼壁和增殖,差異顯著(P<0.05),雖然離散胚組的胚胎貼壁率(88.9%)顯著高于挑破透明帶組(53.8%)(P<0.05),但挑破透明帶組的ICM形成率(48.8%)高于離散胚組(40.0%)(P<0.05),挑破透明帶組F1、F2代兔類ES細胞的剋隆率分彆為35.7%和33.9%,均顯著高于其他兩組(P<0.05),最高傳至30代.穫得的兔類ES細胞經堿性燐痠酶染色檢測呈暘性.提取兔類ES細胞集落的RNA,經RT-PCR檢測,得到擴增多能基因GAPDH、Nanog和Sox2與預期大小一緻的目的片段.體外分化形成具有3箇胚層構成的類胚體(embryoid bodies,EBs).結果錶明,挑破透明帶有利于提高從兔胚胎中分離胚胎榦細胞的效率,能更好的支持兔類ES細胞的培養與增殖.
탐토토(Lepus brachyurus)배태적불동처리방법대토조기배태체외발육능력적영향,사선출괄합토류배태간세포(embryonic stem,ES)분리배양적토배태적교가처리방법.장토배태용3충불동적방식진행처리,관찰토류ES세포첩벽、극륭、생장정황,병대소득적토류ES세포진행감성린산매활성감정、간세포전록인자적RT-PCR검측화체외분화능력적감정.결과현시,도파투명대법화배태분할법교대조조득도적배태경용역첩벽화증식,차이현저(P<0.05),수연리산배조적배태첩벽솔(88.9%)현저고우도파투명대조(53.8%)(P<0.05),단도파투명대조적ICM형성솔(48.8%)고우리산배조(40.0%)(P<0.05),도파투명대조F1、F2대토류ES세포적극륭솔분별위35.7%화33.9%,균현저고우기타량조(P<0.05),최고전지30대.획득적토류ES세포경감성린산매염색검측정양성.제취토류ES세포집락적RNA,경RT-PCR검측,득도확증다능기인GAPDH、Nanog화Sox2여예기대소일치적목적편단.체외분화형성구유3개배층구성적류배체(embryoid bodies,EBs).결과표명,도파투명대유리우제고종토배태중분리배태간세포적효솔,능경호적지지토류ES세포적배양여증식.