农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2014年
7期
832-840
,共9页
刘燕霞%彭廷%赵亚帆%杜彦修%张静%李俊周%孙红正%赵全志
劉燕霞%彭廷%趙亞帆%杜彥脩%張靜%李俊週%孫紅正%趙全誌
류연하%팽정%조아범%두언수%장정%리준주%손홍정%조전지
水稻%RNAi载体构建%沉默效果
水稻%RNAi載體構建%沉默效果
수도%RNAi재체구건%침묵효과
Rice%RNAi vector construction%Silencing effect
RNA干扰(RNAi)技术是研究基因功能的一种常用方法,为了快捷高效地构建水稻(简易RNAi表达载体,本研究采用简易RNAi构建法,设计3'末端9个碱基互补的正向和反向寡聚核苷酸引物,通过聚合酶延伸成为具有反向重复序列的小干扰片段.以pCAMBIA 1301-Gt 13a为表达载体,将小干扰片段与表达载体经过一次双酶切与连接得到RNAi载体.用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法得到水稻(Oryza sativa ssp.japonica)转基因株系后,用叶片GUS染色和qRT-PCR法,对RNAi转基因水稻和野生型日本晴叶片GUS组织活性和籽粒中目的基因表达量进行检测.水稻叶片GUS染色结果显示,有10株转基因水稻叶片切口处呈现蓝色,而野生型无显色反应,说明RNAi载体T-DNA区域的基因已整合到水稻基因组上,并表达.在mRNA水平上转基因水稻籽粒中目的基因相对表达量降低至18％～55％,差异极显著(P＜0.01),表明整合在水稻基因组上的小干扰片段能降低目的基因的表达水平.籽粒灌浆成熟后对10株转基因水稻及野生型日本晴籽粒的单粒重、粒长、粒宽和厚度分别进行测量.与野生型日本晴相比,转基因水稻籽粒单粒重发生显著性降低(P＜0.05),籽粒变小,长和宽都发生显著性变化(P＜0.05),说明简易RNAi载体对水稻目的基因的表达起到很好的沉默效果.本研究不仅为利用简易RNAi构建法研究水稻功能提供了依据,也为快捷高效地研究水稻基因功能提供了基础资料.
RNA榦擾(RNAi)技術是研究基因功能的一種常用方法,為瞭快捷高效地構建水稻(簡易RNAi錶達載體,本研究採用簡易RNAi構建法,設計3'末耑9箇堿基互補的正嚮和反嚮寡聚覈苷痠引物,通過聚閤酶延伸成為具有反嚮重複序列的小榦擾片段.以pCAMBIA 1301-Gt 13a為錶達載體,將小榦擾片段與錶達載體經過一次雙酶切與連接得到RNAi載體.用農桿菌(Agrobacterium tumefaciens)介導法得到水稻(Oryza sativa ssp.japonica)轉基因株繫後,用葉片GUS染色和qRT-PCR法,對RNAi轉基因水稻和野生型日本晴葉片GUS組織活性和籽粒中目的基因錶達量進行檢測.水稻葉片GUS染色結果顯示,有10株轉基因水稻葉片切口處呈現藍色,而野生型無顯色反應,說明RNAi載體T-DNA區域的基因已整閤到水稻基因組上,併錶達.在mRNA水平上轉基因水稻籽粒中目的基因相對錶達量降低至18％～55％,差異極顯著(P＜0.01),錶明整閤在水稻基因組上的小榦擾片段能降低目的基因的錶達水平.籽粒灌漿成熟後對10株轉基因水稻及野生型日本晴籽粒的單粒重、粒長、粒寬和厚度分彆進行測量.與野生型日本晴相比,轉基因水稻籽粒單粒重髮生顯著性降低(P＜0.05),籽粒變小,長和寬都髮生顯著性變化(P＜0.05),說明簡易RNAi載體對水稻目的基因的錶達起到很好的沉默效果.本研究不僅為利用簡易RNAi構建法研究水稻功能提供瞭依據,也為快捷高效地研究水稻基因功能提供瞭基礎資料.
RNA간우(RNAi)기술시연구기인공능적일충상용방법,위료쾌첩고효지구건수도(간역RNAi표체재체,본연구채용간역RNAi구건법,설계3'말단9개감기호보적정향화반향과취핵감산인물,통과취합매연신성위구유반향중복서렬적소간우편단.이pCAMBIA 1301-Gt 13a위표체재체,장소간우편단여표체재체경과일차쌍매절여련접득도RNAi재체.용농간균(Agrobacterium tumefaciens)개도법득도수도(Oryza sativa ssp.japonica)전기인주계후,용협편GUS염색화qRT-PCR법,대RNAi전기인수도화야생형일본청협편GUS조직활성화자립중목적기인표체량진행검측.수도협편GUS염색결과현시,유10주전기인수도협편절구처정현람색,이야생형무현색반응,설명RNAi재체T-DNA구역적기인이정합도수도기인조상,병표체.재mRNA수평상전기인수도자립중목적기인상대표체량강저지18％～55％,차이겁현저(P＜0.01),표명정합재수도기인조상적소간우편단능강저목적기인적표체수평.자립관장성숙후대10주전기인수도급야생형일본청자립적단립중、립장、립관화후도분별진행측량.여야생형일본청상비,전기인수도자립단립중발생현저성강저(P＜0.05),자립변소,장화관도발생현저성변화(P＜0.05),설명간역RNAi재체대수도목적기인적표체기도흔호적침묵효과.본연구불부위이용간역RNAi구건법연구수도공능제공료의거,야위쾌첩고효지연구수도기인공능제공료기출자료.
