中国粮油学报
中國糧油學報
중국량유학보
JOURNAL OF THE CHINESE CEREALS AND OILS ASSOCIATION
2013年
7期
41-45
,共5页
刘强%刘玉珍%刘东杰%郑艳宁%秦文
劉彊%劉玉珍%劉東傑%鄭豔寧%秦文
류강%류옥진%류동걸%정염저%진문
羟基脂肪酸%大肠杆菌%P450 BM3%脂肪酸
羥基脂肪痠%大腸桿菌%P450 BM3%脂肪痠
간기지방산%대장간균%P450 BM3%지방산
hydroxyfatty acid%E.coli%P450 BM3%fatty acid
羟基脂肪酸(Hydroxyfatty Acid,HFA)是一种有多种用途和广阔应用前景的多碳化学品.细胞色素P450单加氧酶(P450 P450 BM3)可高特异性的催化脂肪酸的ω碳位发生羟基化反应而生成羟基脂肪酸,该研究利用工程大肠杆菌成功表达了来源于巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)的单加氧酶基因P450 BM3,实现了底物脂肪酸的成功转化.最终获得了羟基十二酸和羟基十四酸的最高产量分别为593.3 mg/L和547.3 mg/L,同时外源脂肪酸的转化率分别为59.7％和52.3％.对3种产物ω1、ω2、ω3-HFA进行定量分析发现3种产物的产量基本相同,表明单加氧酶对脂肪酸的羟基化位置没有特定偏爱性.最后通过优化表达载体的拷贝数来进一步优化单加氧酶基因P450 BM3的表达水平,最终利用中拷贝数质粒载体pACYCDuet-1表达单加氧酶基因P450 BM3获得了547.3 mg/L的羟基十四酸,代表了目前羟基十四酸生产的一个较高水平.
羥基脂肪痠(Hydroxyfatty Acid,HFA)是一種有多種用途和廣闊應用前景的多碳化學品.細胞色素P450單加氧酶(P450 P450 BM3)可高特異性的催化脂肪痠的ω碳位髮生羥基化反應而生成羥基脂肪痠,該研究利用工程大腸桿菌成功錶達瞭來源于巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)的單加氧酶基因P450 BM3,實現瞭底物脂肪痠的成功轉化.最終穫得瞭羥基十二痠和羥基十四痠的最高產量分彆為593.3 mg/L和547.3 mg/L,同時外源脂肪痠的轉化率分彆為59.7％和52.3％.對3種產物ω1、ω2、ω3-HFA進行定量分析髮現3種產物的產量基本相同,錶明單加氧酶對脂肪痠的羥基化位置沒有特定偏愛性.最後通過優化錶達載體的拷貝數來進一步優化單加氧酶基因P450 BM3的錶達水平,最終利用中拷貝數質粒載體pACYCDuet-1錶達單加氧酶基因P450 BM3穫得瞭547.3 mg/L的羥基十四痠,代錶瞭目前羥基十四痠生產的一箇較高水平.
간기지방산(Hydroxyfatty Acid,HFA)시일충유다충용도화엄활응용전경적다탄화학품.세포색소P450단가양매(P450 P450 BM3)가고특이성적최화지방산적ω탄위발생간기화반응이생성간기지방산,해연구이용공정대장간균성공표체료래원우거대아포간균(Bacillus megaterium)적단가양매기인P450 BM3,실현료저물지방산적성공전화.최종획득료간기십이산화간기십사산적최고산량분별위593.3 mg/L화547.3 mg/L,동시외원지방산적전화솔분별위59.7％화52.3％.대3충산물ω1、ω2、ω3-HFA진행정량분석발현3충산물적산량기본상동,표명단가양매대지방산적간기화위치몰유특정편애성.최후통과우화표체재체적고패수래진일보우화단가양매기인P450 BM3적표체수평,최종이용중고패수질립재체pACYCDuet-1표체단가양매기인P450 BM3획득료547.3 mg/L적간기십사산,대표료목전간기십사산생산적일개교고수평.
