猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞中非结构蛋白Nsp2表达分析
저번식여호흡종합정병독감염세포중비결구단백Nsp2표체분석
Analysis of Nsp2 Expression in Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Infected Cells
  • 万方数据
    畜牧兽医学报 축목수의학보

    2013年 7期 1109-1116 ,共8页

    温贵兰%张涵淞%扈鸿霞%章先%张毅%王晓杜%李肖梁%方维焕

    온귀란%장함송%호홍하%장선%장의%왕효두%리초량%방유환

    猪繁殖与呼吸综合征病毒%非结构蛋白Nsp2%表达与剪切方式 豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%非結構蛋白Nsp2%錶達與剪切方式
    저번식여호흡종합정병독%비결구단백Nsp2%표체여전절방식
    reproductive and respiratory syndrome virus%non-structural protein Nsp2%patterns of expression and cleavage
    猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白Nsp2对病毒复制和致病具有重要作用,本研究旨在分析Nsp2在Marc-145细胞内的分布与表达.构建nsp2含PL2区域基因片段的原核表达载体,重组蛋白纯化后作为免疫抗原,制备Nsp2特异性单克隆抗体.将携带nsp2基因的真核表达载体转染至Marc-145及HEK293细胞,或将PRRSV感染Marc-145细胞后不同时间点收集细胞样品.免疫荧光观察Nsp2在转染细胞中的亚细胞定位,免疫印迹分析Nsp2在真核细胞中的表达.筛选获得了1株稳定分泌特异性抗Nsp2的单克隆杂交瘤细胞株,能用于免疫荧光和印迹分析.重组真核表达质粒转染Marc-145与HEK293细胞后,Nsp2主要定位于细胞质中,免疫印迹检测到约为120与50 ku的蛋白条带.PRRSV感染Marc-145细胞4h即可检测到Nsp2的表达,主要定位于细胞核周围,随着感染时间延长Nsp2分布范围逐渐扩大至整个细胞质.病毒感染8h,可检测到120 ku左右的Nsp2蛋白条带,感染后12h可检测到70和50 ku左右的Nsp2蛋白,且蛋白表达量随感染时间延长显著增多.PRRSV感染细胞中Nsp2的表达与剪切分析,为深入研究该蛋白在病毒复制和致病中的功能奠定了基础.
    저번식여호흡종합정병독(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)비결구단백Nsp2대병독복제화치병구유중요작용,본연구지재분석Nsp2재Marc-145세포내적분포여표체.구건nsp2함PL2구역기인편단적원핵표체재체,중조단백순화후작위면역항원,제비Nsp2특이성단극륭항체.장휴대nsp2기인적진핵표체재체전염지Marc-145급HEK293세포,혹장PRRSV감염Marc-145세포후불동시간점수집세포양품.면역형광관찰Nsp2재전염세포중적아세포정위,면역인적분석Nsp2재진핵세포중적표체.사선획득료1주은정분비특이성항Nsp2적단극륭잡교류세포주,능용우면역형광화인적분석.중조진핵표체질립전염Marc-145여HEK293세포후,Nsp2주요정위우세포질중,면역인적검측도약위120여50 ku적단백조대.PRRSV감염Marc-145세포4h즉가검측도Nsp2적표체,주요정위우세포핵주위,수착감염시간연장Nsp2분포범위축점확대지정개세포질.병독감염8h,가검측도120 ku좌우적Nsp2단백조대,감염후12h가검측도70화50 ku좌우적Nsp2단백,차단백표체량수감염시간연장현저증다.PRRSV감염세포중Nsp2적표체여전절분석,위심입연구해단백재병독복제화치병중적공능전정료기출.
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