CAJ | 학술논문

目的:采用不同长度的PML-RARα融合基因片段与pIRES质粒构建真核表达载体,并检测其在真核细胞中的表达.方法:利用逆转录多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)从NB4细胞的RNA中分别扩增出包含PML-RARα基因融合点的长度为245 bp和384 bp的基因片段,并将不同长度的基因片段分别克隆到pIRES质粒中,通过酶切和测序验证重组质粒的正确性.将重组质粒转染K562细胞,通过RT-PCR和实时荧光定量PCR检测该质粒在真核细胞中的转录.结果:NheⅠ/MluⅠ双酶切证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARα融合基因片段,测序结果证明重组质粒中插入片段的碱基序列均完全正确.将构建的pIRES-PML-RARα质粒转染K562细胞后经RT-PCR和实时荧光定量PCR鉴定表明,插入到重组质粒中的PML-RARα基因能够在真核细胞中进行正常转录.结论:成功构建了含有不同长度的PML-RARα基因的真核表达载体,该载体能够在真核细胞中正常转录,为研发DNA疫苗用于治疗急性早幼粒细胞白血病提供重要资料.
목적:채용불동장도적PML-RARα융합기인편단여pIRES질립구건진핵표체재체,병검측기재진핵세포중적표체.방법:이용역전록다취매련반응(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)종NB4세포적RNA중분별확증출포함PML-RARα기인융합점적장도위245 bp화384 bp적기인편단,병장불동장도적기인편단분별극륭도pIRES질립중,통과매절화측서험증중조질립적정학성.장중조질립전염K562세포,통과RT-PCR화실시형광정량PCR검측해질립재진핵세포중적전록.결과:NheⅠ/MluⅠ쌍매절증명중조질립중함유상응대소적PML-RARα융합기인편단,측서결과증명중조질립중삽입편단적감기서렬균완전정학.장구건적pIRES-PML-RARα질립전염K562세포후경RT-PCR화실시형광정량PCR감정표명,삽입도중조질립중적PML-RARα기인능구재진핵세포중진행정상전록.결론:성공구건료함유불동장도적PML-RARα기인적진핵표체재체,해재체능구재진핵세포중정상전록,위연발DNA역묘용우치료급성조유립세포백혈병제공중요자료.