沈阳师范大学学报（自然科学版）
瀋暘師範大學學報（自然科學版）
침양사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHENYANG NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2013年
3期
425-429
,共5页
Penetratin%蛋白转导%质粒构建%绿色荧光蛋白%穿膜%介导
Penetratin%蛋白轉導%質粒構建%綠色熒光蛋白%穿膜%介導
Penetratin%단백전도%질립구건%록색형광단백%천막%개도
Penetratin%protein transduction%plasmid construction%enhance green fluorescent protein (EGFP)%transmembrane%delivery
目的:实验致力于研究正反向细胞穿膜肽Penetratin携带工具的穿膜效率,为进一步解决大分子药物的临床应用奠定基础.方法:通过质粒构建重组成融合质粒载体pET-28a-EGFP,pET-28a-Penetratin(+)-EGFP和pET-28a-Penetratin(－)-EGFP,分别在BL21 (DE3)中进行表达、经过His标签蛋白纯化柱纯化,得到比较纯的融合蛋白,然后用这些蛋白与HeLa细胞共同孵育,进行蛋白质的穿细胞功能检测.结果:His-Penetratin(+)-EGFP和His-Penetratin(－)-EGFP穿细胞膜能力类似,而His-EGFP不具有细胞穿膜功能.结论:经过研究验证正向和反向序列Penetratin穿膜能力类似,并且两种融合蛋白穿膜机制与膜受体无关,属于被动运输的一种,两种融合蛋白对细胞无创伤作用,为开发新药成功建立了技术平台.
目的:實驗緻力于研究正反嚮細胞穿膜肽Penetratin攜帶工具的穿膜效率,為進一步解決大分子藥物的臨床應用奠定基礎.方法:通過質粒構建重組成融閤質粒載體pET-28a-EGFP,pET-28a-Penetratin(+)-EGFP和pET-28a-Penetratin(－)-EGFP,分彆在BL21 (DE3)中進行錶達、經過His標籤蛋白純化柱純化,得到比較純的融閤蛋白,然後用這些蛋白與HeLa細胞共同孵育,進行蛋白質的穿細胞功能檢測.結果:His-Penetratin(+)-EGFP和His-Penetratin(－)-EGFP穿細胞膜能力類似,而His-EGFP不具有細胞穿膜功能.結論:經過研究驗證正嚮和反嚮序列Penetratin穿膜能力類似,併且兩種融閤蛋白穿膜機製與膜受體無關,屬于被動運輸的一種,兩種融閤蛋白對細胞無創傷作用,為開髮新藥成功建立瞭技術平檯.
목적:실험치력우연구정반향세포천막태Penetratin휴대공구적천막효솔,위진일보해결대분자약물적림상응용전정기출.방법:통과질립구건중조성융합질립재체pET-28a-EGFP,pET-28a-Penetratin(+)-EGFP화pET-28a-Penetratin(－)-EGFP,분별재BL21 (DE3)중진행표체、경과His표첨단백순화주순화,득도비교순적융합단백,연후용저사단백여HeLa세포공동부육,진행단백질적천세포공능검측.결과:His-Penetratin(+)-EGFP화His-Penetratin(－)-EGFP천세포막능력유사,이His-EGFP불구유세포천막공능.결론:경과연구험증정향화반향서렬Penetratin천막능력유사,병차량충융합단백천막궤제여막수체무관,속우피동운수적일충,량충융합단백대세포무창상작용,위개발신약성공건립료기술평태.
