宁夏医科大学学报
寧夏醫科大學學報
저하의과대학학보
JOURNAL OF NINGXIA MEDICAL COLLEGE
2013年
6期
679-682,封3
,共5页
郭晖%王占伟%郝文炯%赵巍%沈冰
郭暉%王佔偉%郝文炯%趙巍%瀋冰
곽휘%왕점위%학문형%조외%침빙
增殖抑制基因%腺病毒%恶性胶质瘤
增殖抑製基因%腺病毒%噁性膠質瘤
증식억제기인%선병독%악성효질류
hyperplasia suppressor gene%adenovirus%spongiocytoma
目的 构建大鼠增殖抑制基因(rat hyperplasia suppressor gene,rHSG)的腺病毒载体,观察其在转染大鼠C6胶质瘤细胞后的表达.方法 由前期构建的pGM-T-rHSG质粒中酶切rHSG基因片段,亚克隆入 pShuttle-CMV-EGFP重组穿梭载体中,而后与腺病毒骨架质粒pAdxsi酶切连接,经过抗性筛选及酶切鉴定得到阳性的pAdxsi-GFP-rHSG重组质粒；pAdxsi-GFP-rHSG质粒经PacI线性化后转染293细胞,包装重组腺病毒,进行PCR鉴定和PCR产物测序鉴定,Westem-blot法检测C6胶质瘤细胞转染rHSG后的表达效果.结果 酶切鉴定证实rHSG基因正确插入穿梭载体pShuttle-CMV-EGFP,收获病毒后的PCR及测序鉴定pAdxsi-GFP-rHSG重组成功,并能在C6胶质瘤细胞内高效表达.结论 成功构建出了介导大鼠增殖抑制基因的腺病毒载体pAdxsi-GFP-rHSG,能在C6胶质瘤细胞内高效表达.
目的 構建大鼠增殖抑製基因(rat hyperplasia suppressor gene,rHSG)的腺病毒載體,觀察其在轉染大鼠C6膠質瘤細胞後的錶達.方法 由前期構建的pGM-T-rHSG質粒中酶切rHSG基因片段,亞剋隆入 pShuttle-CMV-EGFP重組穿梭載體中,而後與腺病毒骨架質粒pAdxsi酶切連接,經過抗性篩選及酶切鑒定得到暘性的pAdxsi-GFP-rHSG重組質粒；pAdxsi-GFP-rHSG質粒經PacI線性化後轉染293細胞,包裝重組腺病毒,進行PCR鑒定和PCR產物測序鑒定,Westem-blot法檢測C6膠質瘤細胞轉染rHSG後的錶達效果.結果 酶切鑒定證實rHSG基因正確插入穿梭載體pShuttle-CMV-EGFP,收穫病毒後的PCR及測序鑒定pAdxsi-GFP-rHSG重組成功,併能在C6膠質瘤細胞內高效錶達.結論 成功構建齣瞭介導大鼠增殖抑製基因的腺病毒載體pAdxsi-GFP-rHSG,能在C6膠質瘤細胞內高效錶達.
목적 구건대서증식억제기인(rat hyperplasia suppressor gene,rHSG)적선병독재체,관찰기재전염대서C6효질류세포후적표체.방법 유전기구건적pGM-T-rHSG질립중매절rHSG기인편단,아극륭입 pShuttle-CMV-EGFP중조천사재체중,이후여선병독골가질립pAdxsi매절련접,경과항성사선급매절감정득도양성적pAdxsi-GFP-rHSG중조질립；pAdxsi-GFP-rHSG질립경PacI선성화후전염293세포,포장중조선병독,진행PCR감정화PCR산물측서감정,Westem-blot법검측C6효질류세포전염rHSG후적표체효과.결과 매절감정증실rHSG기인정학삽입천사재체pShuttle-CMV-EGFP,수획병독후적PCR급측서감정pAdxsi-GFP-rHSG중조성공,병능재C6효질류세포내고효표체.결론 성공구건출료개도대서증식억제기인적선병독재체pAdxsi-GFP-rHSG,능재C6효질류세포내고효표체.
