南方农业学报
南方農業學報
남방농업학보
GUANGXI AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
6期
1022-1025
,共4页
苏秀珍%蒋钦杨%陈少梅%郭亚芬%兰干球
囌秀珍%蔣欽楊%陳少梅%郭亞芬%蘭榦毬
소수진%장흠양%진소매%곽아분%란간구
广西巴马小型猪%载脂蛋白E基因%pEGFP-C1载体%重组质粒%真核表达载体
廣西巴馬小型豬%載脂蛋白E基因%pEGFP-C1載體%重組質粒%真覈錶達載體
엄서파마소형저%재지단백E기인%pEGFP-C1재체%중조질립%진핵표체재체
Guangxi Bama mini-pig%ApoE gene%pEGFP-C1 vector%recombinant plasmids%eukaryotic expression vector
[目的]构建广西巴马小型猪载脂蛋白E基因(ApoE)真核表达载体,为生产转ApoE基因的广西巴马小型猪奠定基础.[方法]采用RT-PCR从广西巴马小型猪肝组织中扩增出ApoE基因编码序列,将该基因连接至pEGFP-C1载体上,利用双酶切和测序对重组质粒pEGFP-C 1-ApoE进行鉴定,并将重组质粒pEGFP-C1-ApoE转染PK15细胞.[结果]广西巴马小型猪ApoE基因编码区序列长954 bp,编码317个氨基酸,与GenBank已公布的猪ApoE基因cDNA序列(NM_214308)对应区段同源性为100％.构建的重组质粒pEGFP-C1-ApoE转染PK15细胞48 h后,在荧光显微镜下转染细胞发出荧光,细胞形态清晰,可见细胞核.[结论]广西巴马小型猪ApoE基因能与pEGFP-C1载体重组构建pEGFP-C1-ApoE真核表达载体,有效表达出ApoE蛋白.
[目的]構建廣西巴馬小型豬載脂蛋白E基因(ApoE)真覈錶達載體,為生產轉ApoE基因的廣西巴馬小型豬奠定基礎.[方法]採用RT-PCR從廣西巴馬小型豬肝組織中擴增齣ApoE基因編碼序列,將該基因連接至pEGFP-C1載體上,利用雙酶切和測序對重組質粒pEGFP-C 1-ApoE進行鑒定,併將重組質粒pEGFP-C1-ApoE轉染PK15細胞.[結果]廣西巴馬小型豬ApoE基因編碼區序列長954 bp,編碼317箇氨基痠,與GenBank已公佈的豬ApoE基因cDNA序列(NM_214308)對應區段同源性為100％.構建的重組質粒pEGFP-C1-ApoE轉染PK15細胞48 h後,在熒光顯微鏡下轉染細胞髮齣熒光,細胞形態清晰,可見細胞覈.[結論]廣西巴馬小型豬ApoE基因能與pEGFP-C1載體重組構建pEGFP-C1-ApoE真覈錶達載體,有效錶達齣ApoE蛋白.
[목적]구건엄서파마소형저재지단백E기인(ApoE)진핵표체재체,위생산전ApoE기인적엄서파마소형저전정기출.[방법]채용RT-PCR종엄서파마소형저간조직중확증출ApoE기인편마서렬,장해기인련접지pEGFP-C1재체상,이용쌍매절화측서대중조질립pEGFP-C 1-ApoE진행감정,병장중조질립pEGFP-C1-ApoE전염PK15세포.[결과]엄서파마소형저ApoE기인편마구서렬장954 bp,편마317개안기산,여GenBank이공포적저ApoE기인cDNA서렬(NM_214308)대응구단동원성위100％.구건적중조질립pEGFP-C1-ApoE전염PK15세포48 h후,재형광현미경하전염세포발출형광,세포형태청석,가견세포핵.[결론]엄서파마소형저ApoE기인능여pEGFP-C1재체중조구건pEGFP-C1-ApoE진핵표체재체,유효표체출ApoE단백.
