国际检验医学杂志
國際檢驗醫學雜誌
국제검험의학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2013年
13期
1635-1637
,共3页
陈昌国%刘敏%郭建巍%张建肖%赵强元%李娜%王珍光
陳昌國%劉敏%郭建巍%張建肖%趙彊元%李娜%王珍光
진창국%류민%곽건외%장건초%조강원%리나%왕진광
干扰素γ,重组%腺病毒科%遗传载体
榦擾素γ,重組%腺病毒科%遺傳載體
간우소γ,중조%선병독과%유전재체
interferon-gamma,recombinant%adenoviridae%genetic vectors
目的 快速构建hIFN-γ腺病毒载体.方法 Trizol法提取IFN-γ(10 ng/mL)刺激的Raji细胞总RNA,以Oligo引物进行反转录获得cDNA序列,PCR法钓取人hIFN-γ的cDNA序列并插入pAdTrack-CMV载体中获得pAdTrack-CMV-hIFN-γ表达载体;然后将pAdEasy-1电转入BJ5183感受态菌并通过硫酸链霉素和氨苄青霉素双抗筛选获得pAdEasy-1-BJ5183感受态菌;之后将PmeI线性化的pAdTrack-CMV-hIFN-γ电转入pAdEasy-1-BJ5183感受态菌中并通过卡那霉素抗性筛选获得pAdEasy-1-B J5183-pAdTrack-CMV-hIFN-γ重组体;Pac Ⅰ酶切鉴定.结果 成功获得pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-hIFN-γ腺病毒表达载体.结论 改良的两步法腺病毒表达载体的构建效率远高于同时将线性化pAdTrack-CMV-hIFN-γ与pAdEasy-1电转入BJ5183感受态菌以获得重组体传统方法,节省了实验时间和实验材料.
目的 快速構建hIFN-γ腺病毒載體.方法 Trizol法提取IFN-γ(10 ng/mL)刺激的Raji細胞總RNA,以Oligo引物進行反轉錄穫得cDNA序列,PCR法釣取人hIFN-γ的cDNA序列併插入pAdTrack-CMV載體中穫得pAdTrack-CMV-hIFN-γ錶達載體;然後將pAdEasy-1電轉入BJ5183感受態菌併通過硫痠鏈黴素和氨芐青黴素雙抗篩選穫得pAdEasy-1-BJ5183感受態菌;之後將PmeI線性化的pAdTrack-CMV-hIFN-γ電轉入pAdEasy-1-BJ5183感受態菌中併通過卡那黴素抗性篩選穫得pAdEasy-1-B J5183-pAdTrack-CMV-hIFN-γ重組體;Pac Ⅰ酶切鑒定.結果 成功穫得pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-hIFN-γ腺病毒錶達載體.結論 改良的兩步法腺病毒錶達載體的構建效率遠高于同時將線性化pAdTrack-CMV-hIFN-γ與pAdEasy-1電轉入BJ5183感受態菌以穫得重組體傳統方法,節省瞭實驗時間和實驗材料.
목적 쾌속구건hIFN-γ선병독재체.방법 Trizol법제취IFN-γ(10 ng/mL)자격적Raji세포총RNA,이Oligo인물진행반전록획득cDNA서렬,PCR법조취인hIFN-γ적cDNA서렬병삽입pAdTrack-CMV재체중획득pAdTrack-CMV-hIFN-γ표체재체;연후장pAdEasy-1전전입BJ5183감수태균병통과류산련매소화안변청매소쌍항사선획득pAdEasy-1-BJ5183감수태균;지후장PmeI선성화적pAdTrack-CMV-hIFN-γ전전입pAdEasy-1-BJ5183감수태균중병통과잡나매소항성사선획득pAdEasy-1-B J5183-pAdTrack-CMV-hIFN-γ중조체;Pac Ⅰ매절감정.결과 성공획득pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-hIFN-γ선병독표체재체.결론 개량적량보법선병독표체재체적구건효솔원고우동시장선성화pAdTrack-CMV-hIFN-γ여pAdEasy-1전전입BJ5183감수태균이획득중조체전통방법,절성료실험시간화실험재료.
