北京大学学报（医学版）
北京大學學報（醫學版）
북경대학학보（의학판）
JOURNAL OF BEIJING MEDICAL UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2013年
3期
489-492
,共4页
谢静%曾强%郑扬%廖锋%徐国恒%唐朝枢%耿彬
謝靜%曾彊%鄭颺%廖鋒%徐國恆%唐朝樞%耿彬
사정%증강%정양%료봉%서국항%당조추%경빈
硫化氢%细胞%亚甲基蓝%胱硫醚β合酶%胱硫醚γ裂解酶
硫化氫%細胞%亞甲基藍%胱硫醚β閤酶%胱硫醚γ裂解酶
류화경%세포%아갑기람%광류미β합매%광류미γ렬해매
Hydrogen sulfide%Cells%Methylene blue%Cystathionine gamma-lyase%Cystathionine beta-synthase
目的:建立测定活细胞释放微量硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)的简易方法.方法:在细胞培养板盖上方黏附滤膜,细胞释放的硫化氢与滤膜上的醋酸锌反应产生硫化锌,采用亚甲基蓝分光光度法测定并计算细胞释放的硫化氢的量.应用该方法分别检测了HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞硫化氢的释放量.结果:HepG2细胞添加L-半胱氨酸以及辅酶磷酸吡哆醛后,继续培养12 h,H2S释放量为(859.39±19.12) nmol/(min·106cells)；给予胱硫醚-γ-裂解酶抑制剂炔丙基甘氨酸(DL-propargylglycine,PAG)后,H2S产率下降到(341.34±105.90) nmol/(min·106cells)；胱硫醚-β-合酶抑制剂间羟胺处理后,H2S产率下降到(375.05±174.50) nmol/(min·106cells)；两种酶抑制剂联合使用后H2S释放量显著抑制,为(204.47±97.14) nmol/(min·106cells).人脐静脉内皮细胞也可内源性产生H2S,HUVEC细胞H2S的释放量为(26.23±3.24) nmol/(min·106 cells),约为HepG2细胞产量的1/30.台盼蓝检测细胞活性大于95％,细胞生长状态良好,表明该方法无细胞毒作用,细胞可根据实验需要继续培养.结论:滤膜吸附法简便易行、实用可靠,可应用于活细胞释放硫化氢的测定.
目的:建立測定活細胞釋放微量硫化氫(hydrogen sulfide,H2S)的簡易方法.方法:在細胞培養闆蓋上方黏附濾膜,細胞釋放的硫化氫與濾膜上的醋痠鋅反應產生硫化鋅,採用亞甲基藍分光光度法測定併計算細胞釋放的硫化氫的量.應用該方法分彆檢測瞭HepG2細胞和人臍靜脈內皮細胞硫化氫的釋放量.結果:HepG2細胞添加L-半胱氨痠以及輔酶燐痠吡哆醛後,繼續培養12 h,H2S釋放量為(859.39±19.12) nmol/(min·106cells)；給予胱硫醚-γ-裂解酶抑製劑炔丙基甘氨痠(DL-propargylglycine,PAG)後,H2S產率下降到(341.34±105.90) nmol/(min·106cells)；胱硫醚-β-閤酶抑製劑間羥胺處理後,H2S產率下降到(375.05±174.50) nmol/(min·106cells)；兩種酶抑製劑聯閤使用後H2S釋放量顯著抑製,為(204.47±97.14) nmol/(min·106cells).人臍靜脈內皮細胞也可內源性產生H2S,HUVEC細胞H2S的釋放量為(26.23±3.24) nmol/(min·106 cells),約為HepG2細胞產量的1/30.檯盼藍檢測細胞活性大于95％,細胞生長狀態良好,錶明該方法無細胞毒作用,細胞可根據實驗需要繼續培養.結論:濾膜吸附法簡便易行、實用可靠,可應用于活細胞釋放硫化氫的測定.
목적:건립측정활세포석방미량류화경(hydrogen sulfide,H2S)적간역방법.방법:재세포배양판개상방점부려막,세포석방적류화경여려막상적작산자반응산생류화자,채용아갑기람분광광도법측정병계산세포석방적류화경적량.응용해방법분별검측료HepG2세포화인제정맥내피세포류화경적석방량.결과:HepG2세포첨가L-반광안산이급보매린산필치철후,계속배양12 h,H2S석방량위(859.39±19.12) nmol/(min·106cells)；급여광류미-γ-렬해매억제제결병기감안산(DL-propargylglycine,PAG)후,H2S산솔하강도(341.34±105.90) nmol/(min·106cells)；광류미-β-합매억제제간간알처리후,H2S산솔하강도(375.05±174.50) nmol/(min·106cells)；량충매억제제연합사용후H2S석방량현저억제,위(204.47±97.14) nmol/(min·106cells).인제정맥내피세포야가내원성산생H2S,HUVEC세포H2S적석방량위(26.23±3.24) nmol/(min·106 cells),약위HepG2세포산량적1/30.태반람검측세포활성대우95％,세포생장상태량호,표명해방법무세포독작용,세포가근거실험수요계속배양.결론:려막흡부법간편역행、실용가고,가응용우활세포석방류화경적측정.
