南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2013年
8期
1122-1126
,共5页
邓凡%李松玉%许万福%邹志鹏%柯志勇%曾方银
鄧凡%李鬆玉%許萬福%鄒誌鵬%柯誌勇%曾方銀
산범%리송옥%허만복%추지붕%가지용%증방은
TGF-β1%SMAD3%CSRNP1%基因表达%肿瘤细胞
TGF-β1%SMAD3%CSRNP1%基因錶達%腫瘤細胞
TGF-β1%SMAD3%CSRNP1%기인표체%종류세포
transforming growth factor beta 1%SMAD3%CSRNP1%gene expression%tumor cells
目的 探讨TGF-β1诱导的肿瘤细胞中CSRNP1/AXUD1基因的表达及其调控机制.方法 分别用不同浓度的TGF-βl或相同浓度下不同处理时间处理指数生长期的人肺腺癌细胞A549和人前列腺癌细胞PC-3,荧光定量RT-PCR检测TGF-β1对两种肿瘤细胞中半胱氨酸-丝氨酸蛋白(cystein-serine-rich nuclear protein,CSRNP1)基因表达的剂量和时间依赖性效应；培养的A549细胞血清饥饿后,分别在有无TGF-β1 (20 ng/ml)和环己亚胺(30 μg/ml)作用下处理24h,检测TGF-β1诱导的CSRNP1基因的表达是否需要新蛋白的合成；最后,分别将SMAD3表达质粒flag-SMAD3和显性失活突变体表达质粒(flag-SMAD3-mu转染A549细胞中,并以空质粒pcDNA3.1作为对照.血清饥饿后,进行有无TGF-β1 (20 ng/ml)处理24h,Western blot确定外源性SMAD3的过表达,荧光定量RT-PCR检测SMAD3的过表达对TGF-β1诱导的CSRNP1基因表达的影响.结果 TGF-β1以浓度和时间依赖的方式诱导肿瘤细胞中CSRNP1基因的表达,并需要新的蛋白合成.SMAD3的过表达增加TGF-β1诱导的CSRNP1的表达,而显性失活的SMAD3突变体(SMAD3-mu)的过表达则显著降低TGF-β1诱导的CSRNP1的表达.结论 肿瘤细胞中TGF-β1可能通过激活SMAD3及其下游信号通路而诱导CSRNP1基因的表达.
目的 探討TGF-β1誘導的腫瘤細胞中CSRNP1/AXUD1基因的錶達及其調控機製.方法 分彆用不同濃度的TGF-βl或相同濃度下不同處理時間處理指數生長期的人肺腺癌細胞A549和人前列腺癌細胞PC-3,熒光定量RT-PCR檢測TGF-β1對兩種腫瘤細胞中半胱氨痠-絲氨痠蛋白(cystein-serine-rich nuclear protein,CSRNP1)基因錶達的劑量和時間依賴性效應；培養的A549細胞血清饑餓後,分彆在有無TGF-β1 (20 ng/ml)和環己亞胺(30 μg/ml)作用下處理24h,檢測TGF-β1誘導的CSRNP1基因的錶達是否需要新蛋白的閤成；最後,分彆將SMAD3錶達質粒flag-SMAD3和顯性失活突變體錶達質粒(flag-SMAD3-mu轉染A549細胞中,併以空質粒pcDNA3.1作為對照.血清饑餓後,進行有無TGF-β1 (20 ng/ml)處理24h,Western blot確定外源性SMAD3的過錶達,熒光定量RT-PCR檢測SMAD3的過錶達對TGF-β1誘導的CSRNP1基因錶達的影響.結果 TGF-β1以濃度和時間依賴的方式誘導腫瘤細胞中CSRNP1基因的錶達,併需要新的蛋白閤成.SMAD3的過錶達增加TGF-β1誘導的CSRNP1的錶達,而顯性失活的SMAD3突變體(SMAD3-mu)的過錶達則顯著降低TGF-β1誘導的CSRNP1的錶達.結論 腫瘤細胞中TGF-β1可能通過激活SMAD3及其下遊信號通路而誘導CSRNP1基因的錶達.
목적 탐토TGF-β1유도적종류세포중CSRNP1/AXUD1기인적표체급기조공궤제.방법 분별용불동농도적TGF-βl혹상동농도하불동처리시간처리지수생장기적인폐선암세포A549화인전렬선암세포PC-3,형광정량RT-PCR검측TGF-β1대량충종류세포중반광안산-사안산단백(cystein-serine-rich nuclear protein,CSRNP1)기인표체적제량화시간의뢰성효응；배양적A549세포혈청기아후,분별재유무TGF-β1 (20 ng/ml)화배기아알(30 μg/ml)작용하처리24h,검측TGF-β1유도적CSRNP1기인적표체시부수요신단백적합성；최후,분별장SMAD3표체질립flag-SMAD3화현성실활돌변체표체질립(flag-SMAD3-mu전염A549세포중,병이공질립pcDNA3.1작위대조.혈청기아후,진행유무TGF-β1 (20 ng/ml)처리24h,Western blot학정외원성SMAD3적과표체,형광정량RT-PCR검측SMAD3적과표체대TGF-β1유도적CSRNP1기인표체적영향.결과 TGF-β1이농도화시간의뢰적방식유도종류세포중CSRNP1기인적표체,병수요신적단백합성.SMAD3적과표체증가TGF-β1유도적CSRNP1적표체,이현성실활적SMAD3돌변체(SMAD3-mu)적과표체칙현저강저TGF-β1유도적CSRNP1적표체.결론 종류세포중TGF-β1가능통과격활SMAD3급기하유신호통로이유도CSRNP1기인적표체.
