中国骨伤
中國骨傷
중국골상
CHINA JOURNAL OF ORTHOPAEDICS AND TRAUMATOLOGY
2013年
7期
597-600
,共4页
白洁玉%梁大川%程鹏%杨自权%卫小春
白潔玉%樑大川%程鵬%楊自權%衛小春
백길옥%량대천%정붕%양자권%위소춘
骨关节炎%细胞介导免疫%慢病毒属%SOX9基因%骨髓间充质细胞
骨關節炎%細胞介導免疫%慢病毒屬%SOX9基因%骨髓間充質細胞
골관절염%세포개도면역%만병독속%SOX9기인%골수간충질세포
Osteoarthritis%Cell-mediated immunity%Lentivirus%SOX9 gene%Bone mesenchymal stem cells
目的:构建携带小鼠SOX9基因的慢病毒载体,体外转染小鼠骨髓间充质细胞,观察小鼠SOX9基因在小鼠间充质细胞中的表达.方法:从含有小鼠SOX9基因的质粒提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增目的基因.连接目的基因与经Age-Ⅰ酶切线性化的慢病毒载体,转化感受态的大肠杆菌对质粒进行扩增,筛出阳性转化子,经293T细胞包装,收集病毒后,通过基因测序和限制性核酸内切酶酶切的方法对质粒进行鉴定.Lenti-SOX9-EGFP体外转染小鼠骨髓间充质细胞,利用倒置荧光显微镜观察转染是否成功,并通过流式细胞仪测定转染效率.同时利用RT-PCR和Western Blot检测小鼠SOX9基因的表达.结果:成功构建了携带SOX9基因慢病毒载体,Lenti-SOX9-EGFP能高效转染小鼠骨髓间充质细胞.RT-PCR和Western Blot检测显示经SOX9基因转染的小鼠骨髓间充质细胞表达目的基因产物.结论:利用慢病毒介导SOX9基因成功地转染小鼠骨髓间充质细胞,而且SOX9基因在小鼠骨髓间充质细胞中得到表达,这为SOX9修复软骨损伤的进一步研究奠定了基础.
目的:構建攜帶小鼠SOX9基因的慢病毒載體,體外轉染小鼠骨髓間充質細胞,觀察小鼠SOX9基因在小鼠間充質細胞中的錶達.方法:從含有小鼠SOX9基因的質粒提取總RNA,利用RT-PCR方法擴增目的基因.連接目的基因與經Age-Ⅰ酶切線性化的慢病毒載體,轉化感受態的大腸桿菌對質粒進行擴增,篩齣暘性轉化子,經293T細胞包裝,收集病毒後,通過基因測序和限製性覈痠內切酶酶切的方法對質粒進行鑒定.Lenti-SOX9-EGFP體外轉染小鼠骨髓間充質細胞,利用倒置熒光顯微鏡觀察轉染是否成功,併通過流式細胞儀測定轉染效率.同時利用RT-PCR和Western Blot檢測小鼠SOX9基因的錶達.結果:成功構建瞭攜帶SOX9基因慢病毒載體,Lenti-SOX9-EGFP能高效轉染小鼠骨髓間充質細胞.RT-PCR和Western Blot檢測顯示經SOX9基因轉染的小鼠骨髓間充質細胞錶達目的基因產物.結論:利用慢病毒介導SOX9基因成功地轉染小鼠骨髓間充質細胞,而且SOX9基因在小鼠骨髓間充質細胞中得到錶達,這為SOX9脩複軟骨損傷的進一步研究奠定瞭基礎.
목적:구건휴대소서SOX9기인적만병독재체,체외전염소서골수간충질세포,관찰소서SOX9기인재소서간충질세포중적표체.방법:종함유소서SOX9기인적질립제취총RNA,이용RT-PCR방법확증목적기인.련접목적기인여경Age-Ⅰ매절선성화적만병독재체,전화감수태적대장간균대질립진행확증,사출양성전화자,경293T세포포장,수집병독후,통과기인측서화한제성핵산내절매매절적방법대질립진행감정.Lenti-SOX9-EGFP체외전염소서골수간충질세포,이용도치형광현미경관찰전염시부성공,병통과류식세포의측정전염효솔.동시이용RT-PCR화Western Blot검측소서SOX9기인적표체.결과:성공구건료휴대SOX9기인만병독재체,Lenti-SOX9-EGFP능고효전염소서골수간충질세포.RT-PCR화Western Blot검측현시경SOX9기인전염적소서골수간충질세포표체목적기인산물.결론:이용만병독개도SOX9기인성공지전염소서골수간충질세포,이차SOX9기인재소서골수간충질세포중득도표체,저위SOX9수복연골손상적진일보연구전정료기출.
