中华实用儿科临床杂志
中華實用兒科臨床雜誌
중화실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2013年
14期
1099-1102
,共4页
陈晓春%杨尧%何玺玉%王春枝%王艳%刘欣%吴虹林
陳曉春%楊堯%何璽玉%王春枝%王豔%劉訢%吳虹林
진효춘%양요%하새옥%왕춘지%왕염%류흔%오홍림
肌营养不良%多重链接探针依赖扩增技术%全基因组新一代测序%点突变
肌營養不良%多重鏈接探針依賴擴增技術%全基因組新一代測序%點突變
기영양불량%다중련접탐침의뢰확증기술%전기인조신일대측서%점돌변
Muscular dystrophy%Multiplex ligation-dependent probe amplification%Next-generation sequencing technology%Point mutation
目的 对临床诊断为Duchenne型肌营养不良(DMD)的患儿进行基因检测,分析抗肌萎缩蛋白基因(DMD基因)突变类型及变异大小,探讨DMD分子遗传学诊断策略.方法 对临床诊断为DMD的28例患儿采用多重链接探针依赖扩增技术(MLPA)进行DMD基因检测,然后随机选择MLPA检测阳性的5例和阴性的1例采用DMD全基因捕获探针进一步行全基因组新一代测序(NGS),最后采用PCR和Sanger测序法对所得结果验证.结果 采用MLPA技术对28例患儿进行检测,发现22例阳性结果,包括外显子大片段缺失突变16例,重复突变4例,同时合并缺失和重复突变2例；随机选择MLPA检测阳性的5例和阴性的1例采用NGS技术检测,发现3例外显子缺失突变(exon51 del,chrX:31779857-31795289;exon53 del,chrX:31685440-31747548;exon51-55 del,chrX:31632504-31827732),及2例外显子重复突变(exon45 dup,chrX:31970766-32023816;exon55 dup,chrX:31540860-31649750),与MLPA结果一致,且精确定位了断裂点区域和片段大小,同时发现MLPA检测阴性的1例为点突变(exon54,chrX:31676176,c.7948delG,p.D2650IfsX12),该点突变经PCR扩增和Sanger测序验证,所得结果与NGS检测结果一致.结论 DMD基因突变类型多样,包括外显子缺失和(或)重复、点突变等,应用MLPA技术能有效检出DMD基因外显子大片段缺失、重复以及杂合突变,应用NGS技术不仅能检出缺失和重复突变,并精确判断断裂点位置及大小,还能准确检出微小缺失和点突变,为临床DMD的早期诊断、预后判断及产前诊断提供遗传学帮助.
目的 對臨床診斷為Duchenne型肌營養不良(DMD)的患兒進行基因檢測,分析抗肌萎縮蛋白基因(DMD基因)突變類型及變異大小,探討DMD分子遺傳學診斷策略.方法 對臨床診斷為DMD的28例患兒採用多重鏈接探針依賴擴增技術(MLPA)進行DMD基因檢測,然後隨機選擇MLPA檢測暘性的5例和陰性的1例採用DMD全基因捕穫探針進一步行全基因組新一代測序(NGS),最後採用PCR和Sanger測序法對所得結果驗證.結果 採用MLPA技術對28例患兒進行檢測,髮現22例暘性結果,包括外顯子大片段缺失突變16例,重複突變4例,同時閤併缺失和重複突變2例；隨機選擇MLPA檢測暘性的5例和陰性的1例採用NGS技術檢測,髮現3例外顯子缺失突變(exon51 del,chrX:31779857-31795289;exon53 del,chrX:31685440-31747548;exon51-55 del,chrX:31632504-31827732),及2例外顯子重複突變(exon45 dup,chrX:31970766-32023816;exon55 dup,chrX:31540860-31649750),與MLPA結果一緻,且精確定位瞭斷裂點區域和片段大小,同時髮現MLPA檢測陰性的1例為點突變(exon54,chrX:31676176,c.7948delG,p.D2650IfsX12),該點突變經PCR擴增和Sanger測序驗證,所得結果與NGS檢測結果一緻.結論 DMD基因突變類型多樣,包括外顯子缺失和(或)重複、點突變等,應用MLPA技術能有效檢齣DMD基因外顯子大片段缺失、重複以及雜閤突變,應用NGS技術不僅能檢齣缺失和重複突變,併精確判斷斷裂點位置及大小,還能準確檢齣微小缺失和點突變,為臨床DMD的早期診斷、預後判斷及產前診斷提供遺傳學幫助.
목적 대림상진단위Duchenne형기영양불량(DMD)적환인진행기인검측,분석항기위축단백기인(DMD기인)돌변류형급변이대소,탐토DMD분자유전학진단책략.방법 대림상진단위DMD적28례환인채용다중련접탐침의뢰확증기술(MLPA)진행DMD기인검측,연후수궤선택MLPA검측양성적5례화음성적1례채용DMD전기인포획탐침진일보행전기인조신일대측서(NGS),최후채용PCR화Sanger측서법대소득결과험증.결과 채용MLPA기술대28례환인진행검측,발현22례양성결과,포괄외현자대편단결실돌변16례,중복돌변4례,동시합병결실화중복돌변2례；수궤선택MLPA검측양성적5례화음성적1례채용NGS기술검측,발현3예외현자결실돌변(exon51 del,chrX:31779857-31795289;exon53 del,chrX:31685440-31747548;exon51-55 del,chrX:31632504-31827732),급2예외현자중복돌변(exon45 dup,chrX:31970766-32023816;exon55 dup,chrX:31540860-31649750),여MLPA결과일치,차정학정위료단렬점구역화편단대소,동시발현MLPA검측음성적1례위점돌변(exon54,chrX:31676176,c.7948delG,p.D2650IfsX12),해점돌변경PCR확증화Sanger측서험증,소득결과여NGS검측결과일치.결론 DMD기인돌변류형다양,포괄외현자결실화(혹)중복、점돌변등,응용MLPA기술능유효검출DMD기인외현자대편단결실、중복이급잡합돌변,응용NGS기술불부능검출결실화중복돌변,병정학판단단렬점위치급대소,환능준학검출미소결실화점돌변,위림상DMD적조기진단、예후판단급산전진단제공유전학방조.
