中国真菌学杂志
中國真菌學雜誌
중국진균학잡지
CHINESE JOURNAL OF MYCOLOGY
2013年
3期
129-133
,共5页
韩改革%贾晓东%韩雪琳%赵帅%韩黎
韓改革%賈曉東%韓雪琳%趙帥%韓黎
한개혁%가효동%한설림%조수%한려
融合PCR%烟曲霉%rho 1%基因回补
融閤PCR%煙麯黴%rho 1%基因迴補
융합PCR%연곡매%rho 1%기인회보
fusion PCR%Aspergillus fumigatus%rho1%gene complement
目的 融合PCR是一种常用的构建重组片段或重组质粒的手段,但长片段融合PCR的难度较大.文中将探讨长片段融合PCR过程中引物设计及扩增条件对产物的影响.方法 以构建烟曲霉rho 1基因回补株为例,采用融合PCR的方法扩增重组片段(长达6.5 kb),在引物设计时引入不同大小的同源区,并设置不同的扩增体系.结果 当设计引物的同源区为35 bp,选用具有高扩增效率、高保真性的DNA聚合酶,以及各片段在融合PCR反应体系中的浓度为15 ng/μL时,实现了长达6.5 kb的片段扩增并完成了烟曲霉rho 1回补株的构建.结论 在合适的PCR引物设计、片段浓度配比及聚合酶条件下,长片段融合PCR在丝状真菌的基因敲除及回补株的构建中是一种非常有效的工具.
目的 融閤PCR是一種常用的構建重組片段或重組質粒的手段,但長片段融閤PCR的難度較大.文中將探討長片段融閤PCR過程中引物設計及擴增條件對產物的影響.方法 以構建煙麯黴rho 1基因迴補株為例,採用融閤PCR的方法擴增重組片段(長達6.5 kb),在引物設計時引入不同大小的同源區,併設置不同的擴增體繫.結果 噹設計引物的同源區為35 bp,選用具有高擴增效率、高保真性的DNA聚閤酶,以及各片段在融閤PCR反應體繫中的濃度為15 ng/μL時,實現瞭長達6.5 kb的片段擴增併完成瞭煙麯黴rho 1迴補株的構建.結論 在閤適的PCR引物設計、片段濃度配比及聚閤酶條件下,長片段融閤PCR在絲狀真菌的基因敲除及迴補株的構建中是一種非常有效的工具.
목적 융합PCR시일충상용적구건중조편단혹중조질립적수단,단장편단융합PCR적난도교대.문중장탐토장편단융합PCR과정중인물설계급확증조건대산물적영향.방법 이구건연곡매rho 1기인회보주위례,채용융합PCR적방법확증중조편단(장체6.5 kb),재인물설계시인입불동대소적동원구,병설치불동적확증체계.결과 당설계인물적동원구위35 bp,선용구유고확증효솔、고보진성적DNA취합매,이급각편단재융합PCR반응체계중적농도위15 ng/μL시,실현료장체6.5 kb적편단확증병완성료연곡매rho 1회보주적구건.결론 재합괄적PCR인물설계、편단농도배비급취합매조건하,장편단융합PCR재사상진균적기인고제급회보주적구건중시일충비상유효적공구.
