齐齐哈尔医学院学报
齊齊哈爾醫學院學報
제제합이의학원학보
JOURNAL OF QIQIHAR MEDICAL COLLEGE
2013年
15期
2185-2188
,共4页
王霞%冯辉%林雪烽%徐建荣%孙敏%程莹%王志荣%张卓琦
王霞%馮輝%林雪烽%徐建榮%孫敏%程瑩%王誌榮%張卓琦
왕하%풍휘%림설봉%서건영%손민%정형%왕지영%장탁기
磷酸胆碱聚合物%siRNA%AT1受体%非病毒转基因载体
燐痠膽堿聚閤物%siRNA%AT1受體%非病毒轉基因載體
린산담감취합물%siRNA%AT1수체%비병독전기인재체
目的 探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70载AT1受体siRNA对血管内皮细胞AT1受体表达的影响.方法 应用琼脂糖凝胶电泳表征具有不同N/P比值的MPC30-DEA70与siRNA的复合物；将不同比例的MPC30-DEA70/siRNA基因复合物转染至人脐静脉内皮细胞,应用荧光显微镜(FM)检测其细胞内分布；流式细胞术(FCM)检测转染效率及荧光强度；Western blot法和RT-PCR法检测AT1受体蛋白及mRNA的表达情况.结果 不同N/P比值的基因复合物在电泳中可见不同程度的迟滞现象,随正电性增强而显著.FM观察到MPC30-DEA70/siRNA复合物分布在细胞核周围,FCM结果显示随N/P比值的增大,转染效率明显增加,荧光强度也随之增强.RT-PCR法和Western blot法显示随着N/P比值的增大,基因复合物可使AT1受体的mRNA和蛋白表达明显下降(P＜0.05).结论 MPC30-DEA70可作为AT1受体siRNA的载体转染至血管内皮细胞,下调AT1受体的mRNA及蛋白的表达,提示阳离子磷酸胆碱聚合物可以有效负载和运输siRNA,抑制特异基因的表达,是一种有效的非病毒类转基因载体.
目的 探討新型暘離子燐痠膽堿聚閤物MPC30-DEA70載AT1受體siRNA對血管內皮細胞AT1受體錶達的影響.方法 應用瓊脂糖凝膠電泳錶徵具有不同N/P比值的MPC30-DEA70與siRNA的複閤物；將不同比例的MPC30-DEA70/siRNA基因複閤物轉染至人臍靜脈內皮細胞,應用熒光顯微鏡(FM)檢測其細胞內分佈；流式細胞術(FCM)檢測轉染效率及熒光彊度；Western blot法和RT-PCR法檢測AT1受體蛋白及mRNA的錶達情況.結果 不同N/P比值的基因複閤物在電泳中可見不同程度的遲滯現象,隨正電性增彊而顯著.FM觀察到MPC30-DEA70/siRNA複閤物分佈在細胞覈週圍,FCM結果顯示隨N/P比值的增大,轉染效率明顯增加,熒光彊度也隨之增彊.RT-PCR法和Western blot法顯示隨著N/P比值的增大,基因複閤物可使AT1受體的mRNA和蛋白錶達明顯下降(P＜0.05).結論 MPC30-DEA70可作為AT1受體siRNA的載體轉染至血管內皮細胞,下調AT1受體的mRNA及蛋白的錶達,提示暘離子燐痠膽堿聚閤物可以有效負載和運輸siRNA,抑製特異基因的錶達,是一種有效的非病毒類轉基因載體.
목적 탐토신형양리자린산담감취합물MPC30-DEA70재AT1수체siRNA대혈관내피세포AT1수체표체적영향.방법 응용경지당응효전영표정구유불동N/P비치적MPC30-DEA70여siRNA적복합물；장불동비례적MPC30-DEA70/siRNA기인복합물전염지인제정맥내피세포,응용형광현미경(FM)검측기세포내분포；류식세포술(FCM)검측전염효솔급형광강도；Western blot법화RT-PCR법검측AT1수체단백급mRNA적표체정황.결과 불동N/P비치적기인복합물재전영중가견불동정도적지체현상,수정전성증강이현저.FM관찰도MPC30-DEA70/siRNA복합물분포재세포핵주위,FCM결과현시수N/P비치적증대,전염효솔명현증가,형광강도야수지증강.RT-PCR법화Western blot법현시수착N/P비치적증대,기인복합물가사AT1수체적mRNA화단백표체명현하강(P＜0.05).결론 MPC30-DEA70가작위AT1수체siRNA적재체전염지혈관내피세포,하조AT1수체적mRNA급단백적표체,제시양리자린산담감취합물가이유효부재화운수siRNA,억제특이기인적표체,시일충유효적비병독류전기인재체.
