中南大学学报（医学版）
中南大學學報（醫學版）
중남대학학보（의학판）
JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCES)
2013年
4期
356-364
,共9页
朱洪%张震%刘义%陈燕%谭拥军
硃洪%張震%劉義%陳燕%譚擁軍
주홍%장진%류의%진연%담옹군
Foxa2%P19细胞%DMSO%心肌分化
Foxa2%P19細胞%DMSO%心肌分化
Foxa2%P19세포%DMSO%심기분화
Foxa2%P19 cells%DMSO%cardiac differentiation
目的:研究转录因子forkhead box A2(Foxa2)在P19胚胎癌细胞心肌分化过程中的作用及其分子机制.方法:运用在P19细胞胚胎小体(embryoid bodies,EBs)培养基中加入二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)的方法将P19细胞诱导分化成心肌细胞,运用反转录PCR (reverse transcription PCR,RT-PCR)方法检测诱导分化过程中不同时间点细胞样本中胚胎性干细胞多能性相关基因(Nanog)、心肌分化相关基因[Cerberus1 (Cer1)和Sonic Hedgehog (Shh)]及Foxa2的mRNA水平,用免疫荧光染色的方法检测分化成熟的心肌细胞.同时分别运用转染真核表达质粒pCMV-rFoxa2(大鼠Foxa2)和构建稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)-rFoxa2 P19细胞株的方法以提高P19细胞中Foxa2的表达水平,采用RT-PCR和Western印迹的方法检测上述细胞样本中多能性相关基因和心肌分化相关基因的mRNA和蛋白水平,及其EBs分化体系中心肌分化相关基因的mRNA水平.结果:P19细胞经DMSO诱导后分化形成心肌细胞,并伴随有Foxa2的表达激活.转染pCMV-rFoxa2质粒能在P19细胞中瞬时高量表达rFoxa2并激活其下游Cer1的转录.运用稳定表达GFP-rFoxa2的P19细胞株增高Foxa2的表达可以抑制Nanog的表达,并激活Shh的表达,促进P19细胞EBs心肌分化,表达Cer1和心脏α肌动蛋白(actin,alpha cardiac muscle 1,Actc1).结论:Foxa2参与P19细胞心肌分化过程,Foxa2在DMSO诱导P19细胞心肌分化过程中的作用机制可能为直接抑制Nanog的表达,并激活Cer1和Shh的表达.
目的:研究轉錄因子forkhead box A2(Foxa2)在P19胚胎癌細胞心肌分化過程中的作用及其分子機製.方法:運用在P19細胞胚胎小體(embryoid bodies,EBs)培養基中加入二甲亞砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)的方法將P19細胞誘導分化成心肌細胞,運用反轉錄PCR (reverse transcription PCR,RT-PCR)方法檢測誘導分化過程中不同時間點細胞樣本中胚胎性榦細胞多能性相關基因(Nanog)、心肌分化相關基因[Cerberus1 (Cer1)和Sonic Hedgehog (Shh)]及Foxa2的mRNA水平,用免疫熒光染色的方法檢測分化成熟的心肌細胞.同時分彆運用轉染真覈錶達質粒pCMV-rFoxa2(大鼠Foxa2)和構建穩定錶達綠色熒光蛋白(green fluorescence protein,GFP)-rFoxa2 P19細胞株的方法以提高P19細胞中Foxa2的錶達水平,採用RT-PCR和Western印跡的方法檢測上述細胞樣本中多能性相關基因和心肌分化相關基因的mRNA和蛋白水平,及其EBs分化體繫中心肌分化相關基因的mRNA水平.結果:P19細胞經DMSO誘導後分化形成心肌細胞,併伴隨有Foxa2的錶達激活.轉染pCMV-rFoxa2質粒能在P19細胞中瞬時高量錶達rFoxa2併激活其下遊Cer1的轉錄.運用穩定錶達GFP-rFoxa2的P19細胞株增高Foxa2的錶達可以抑製Nanog的錶達,併激活Shh的錶達,促進P19細胞EBs心肌分化,錶達Cer1和心髒α肌動蛋白(actin,alpha cardiac muscle 1,Actc1).結論:Foxa2參與P19細胞心肌分化過程,Foxa2在DMSO誘導P19細胞心肌分化過程中的作用機製可能為直接抑製Nanog的錶達,併激活Cer1和Shh的錶達.
목적:연구전록인자forkhead box A2(Foxa2)재P19배태암세포심기분화과정중적작용급기분자궤제.방법:운용재P19세포배태소체(embryoid bodies,EBs)배양기중가입이갑아풍(dimethyl sulfoxide,DMSO)적방법장P19세포유도분화성심기세포,운용반전록PCR (reverse transcription PCR,RT-PCR)방법검측유도분화과정중불동시간점세포양본중배태성간세포다능성상관기인(Nanog)、심기분화상관기인[Cerberus1 (Cer1)화Sonic Hedgehog (Shh)]급Foxa2적mRNA수평,용면역형광염색적방법검측분화성숙적심기세포.동시분별운용전염진핵표체질립pCMV-rFoxa2(대서Foxa2)화구건은정표체록색형광단백(green fluorescence protein,GFP)-rFoxa2 P19세포주적방법이제고P19세포중Foxa2적표체수평,채용RT-PCR화Western인적적방법검측상술세포양본중다능성상관기인화심기분화상관기인적mRNA화단백수평,급기EBs분화체계중심기분화상관기인적mRNA수평.결과:P19세포경DMSO유도후분화형성심기세포,병반수유Foxa2적표체격활.전염pCMV-rFoxa2질립능재P19세포중순시고량표체rFoxa2병격활기하유Cer1적전록.운용은정표체GFP-rFoxa2적P19세포주증고Foxa2적표체가이억제Nanog적표체,병격활Shh적표체,촉진P19세포EBs심기분화,표체Cer1화심장α기동단백(actin,alpha cardiac muscle 1,Actc1).결론:Foxa2삼여P19세포심기분화과정,Foxa2재DMSO유도P19세포심기분화과정중적작용궤제가능위직접억제Nanog적표체,병격활Cer1화Shh적표체.
