福建医科大学学报
福建醫科大學學報
복건의과대학학보
JOURNAL OF FUJIAN MEDICAL UNIVERSITY
2013年
2期
65-69
,共5页
罗岚%赵伟%李厚轩%闫福华%陈帅%黄敏
囉嵐%趙偉%李厚軒%閆福華%陳帥%黃敏
라람%조위%리후헌%염복화%진수%황민
白细胞介素10%放线杆菌属%脂多糖类%肺泡巨噬细胞
白細胞介素10%放線桿菌屬%脂多糖類%肺泡巨噬細胞
백세포개소10%방선간균속%지다당류%폐포거서세포
interlukin 10%Actinobacillus actinomycetemcomitans%lipopolysaccharide%alveolar macro-phages
目的研究白细胞介素10(IL-10)在伴放线放线杆菌(Aa)脂多糖(LPS)刺激兔肺泡巨噬细胞(AM )产生炎症反应过程中的免疫调节作用及其机制。方法分离纯化AM ,100 ng/mL IL-10预孵2 h ,加入Aa-LPS刺激继续培养24 h ,流式细胞术检测AM 对荧光标记Aa(FITC-Aa)的吞噬指数(PI)情况及AM 的活性氧(ROS)水平;荧光定量PCR法检测CD14、TLR4、SRA和M HC-Ⅱ基因表达的变化;硝酸还原酶法检测AM 的NO分泌情况。结果 IL-10上调Aa-LPS诱导的AM 的PI(P<0.05),下调Aa-LPS诱导的AM膜表面受体CD14、TLR4、M HC-Ⅱ mRNA的表达(P<0.01),而SRA mRNA表达量升高(P<0.05);IL-10抑制Aa-LPS诱导的AM的ROS和NO水平(P<0.01)。结论 IL-10可以通过上调 Aa-LPS诱导的 AM SRA 基因表达,下调CD14、TLR4、M HC-Ⅱ基因表达,并且抑制其产生ROS和NO的水平,从而调节免疫反应,限制炎症介质的大量释放,同时增强AM的吞噬作用,清除感染。
目的研究白細胞介素10(IL-10)在伴放線放線桿菌(Aa)脂多糖(LPS)刺激兔肺泡巨噬細胞(AM )產生炎癥反應過程中的免疫調節作用及其機製。方法分離純化AM ,100 ng/mL IL-10預孵2 h ,加入Aa-LPS刺激繼續培養24 h ,流式細胞術檢測AM 對熒光標記Aa(FITC-Aa)的吞噬指數(PI)情況及AM 的活性氧(ROS)水平;熒光定量PCR法檢測CD14、TLR4、SRA和M HC-Ⅱ基因錶達的變化;硝痠還原酶法檢測AM 的NO分泌情況。結果 IL-10上調Aa-LPS誘導的AM 的PI(P<0.05),下調Aa-LPS誘導的AM膜錶麵受體CD14、TLR4、M HC-Ⅱ mRNA的錶達(P<0.01),而SRA mRNA錶達量升高(P<0.05);IL-10抑製Aa-LPS誘導的AM的ROS和NO水平(P<0.01)。結論 IL-10可以通過上調 Aa-LPS誘導的 AM SRA 基因錶達,下調CD14、TLR4、M HC-Ⅱ基因錶達,併且抑製其產生ROS和NO的水平,從而調節免疫反應,限製炎癥介質的大量釋放,同時增彊AM的吞噬作用,清除感染。
목적연구백세포개소10(IL-10)재반방선방선간균(Aa)지다당(LPS)자격토폐포거서세포(AM )산생염증반응과정중적면역조절작용급기궤제。방법분리순화AM ,100 ng/mL IL-10예부2 h ,가입Aa-LPS자격계속배양24 h ,류식세포술검측AM 대형광표기Aa(FITC-Aa)적탄서지수(PI)정황급AM 적활성양(ROS)수평;형광정량PCR법검측CD14、TLR4、SRA화M HC-Ⅱ기인표체적변화;초산환원매법검측AM 적NO분비정황。결과 IL-10상조Aa-LPS유도적AM 적PI(P<0.05),하조Aa-LPS유도적AM막표면수체CD14、TLR4、M HC-Ⅱ mRNA적표체(P<0.01),이SRA mRNA표체량승고(P<0.05);IL-10억제Aa-LPS유도적AM적ROS화NO수평(P<0.01)。결론 IL-10가이통과상조 Aa-LPS유도적 AM SRA 기인표체,하조CD14、TLR4、M HC-Ⅱ기인표체,병차억제기산생ROS화NO적수평,종이조절면역반응,한제염증개질적대량석방,동시증강AM적탄서작용,청제감염。
Objective To evaluate the potential immunomodulatory effects and explore the possi-ble mechanisms of interlukin 10 on activation of Actinobacillus actinomycetemcomitans(Aa)-LPS induced alveolar macrophages(AM ) . Methods Isolation and purification of AM ,AM was pre-incubated with 100 ng/mL IL-10 for 2 h and then activated by Aa-LPS for 24 h :phagocytic index (PI) was measured by flow cytometry ;RT-PCR was used to detect the expression of gene CD14 ,TLR4 ,SRA ,M HC-Ⅱ ;flow cytom-etry was used to assess ROS ;nitrate reductase assay was used to examin the amount of NO production . Results IL-10 increase the PI of Aa-LPS activated AM (P<0 .05) ,remarkably inhibited the expressions of CD14 ,TLR4 ,M HC-Ⅱ(P<0 .01) ,but enhanced the expression of SRA (P<0 .05) ,significantly sup-pressed the ROS(P<0 .01) and NO production(P<0 .01) . Conclusions IL-10 can modulate of immune response and down-regulate excessive inflammatory mediator production and enhance phagocytosis of Aa-LPS activated AM via increasing SRA ,suppressing CD14 ,TLR4 ,M HC-Ⅱexpression ,and inhibit ROS , NO production .