热带作物学报
熱帶作物學報
열대작물학보
CHINESE JOURNAL OF TROPICAL CROPS
2013年
5期
892-898
,共7页
吴凯朝%李杨瑞%杨丽涛%吴建明
吳凱朝%李楊瑞%楊麗濤%吳建明
오개조%리양서%양려도%오건명
甘蔗%cDNA-SCoT%差异表达
甘蔗%cDNA-SCoT%差異錶達
감자%cDNA-SCoT%차이표체
Sugarcane%CDNA-SCoT%Differential expression
cDNA-SCoT差异显示分析是应用于植物基因差异表达研究的一项新技术.本研究以甘蔗品种桂糖11号根尖为材料,提取总RNA并反转录第1链cDNA,对影响甘蔗cDNA-SCoT差异显示PCR反应的cDNA模板、SCoT引物、dNTPs、Taq DNA聚合酶和Mg2+等因子进行优化,建立甘蔗cDNA-SCoT反应体系,同时应用优化后反应体系分离25％PEG6000胁迫诱导甘蔗根尖差异表达基因片段.结果表明:各项因子均对PCR扩增效果存在影响,20μL反应体系中各因子的最佳含量如下:cDNA 80 ng、引物浓度1.0 μmol/L、Taq DNA聚合酶2.0 U、dNTPs浓度200 μmo1/L、Mg2+浓度1.8 mmol/L.研究结果还显示,SCoT引物扩增多态性丰富,平均每条引物扩增条带30条,多态性条带比率为46.9％,6条引物分离得到PEG诱导甘蔗根尖特异表达片段45条,表明本研究所建立的甘蔗cDNA-SCoT反应体系具有操作简便、结果稳定、重复性好、成本低、多态性丰富等优点,可为甘蔗基因差异表达研究提供新的技术支持.
cDNA-SCoT差異顯示分析是應用于植物基因差異錶達研究的一項新技術.本研究以甘蔗品種桂糖11號根尖為材料,提取總RNA併反轉錄第1鏈cDNA,對影響甘蔗cDNA-SCoT差異顯示PCR反應的cDNA模闆、SCoT引物、dNTPs、Taq DNA聚閤酶和Mg2+等因子進行優化,建立甘蔗cDNA-SCoT反應體繫,同時應用優化後反應體繫分離25％PEG6000脅迫誘導甘蔗根尖差異錶達基因片段.結果錶明:各項因子均對PCR擴增效果存在影響,20μL反應體繫中各因子的最佳含量如下:cDNA 80 ng、引物濃度1.0 μmol/L、Taq DNA聚閤酶2.0 U、dNTPs濃度200 μmo1/L、Mg2+濃度1.8 mmol/L.研究結果還顯示,SCoT引物擴增多態性豐富,平均每條引物擴增條帶30條,多態性條帶比率為46.9％,6條引物分離得到PEG誘導甘蔗根尖特異錶達片段45條,錶明本研究所建立的甘蔗cDNA-SCoT反應體繫具有操作簡便、結果穩定、重複性好、成本低、多態性豐富等優點,可為甘蔗基因差異錶達研究提供新的技術支持.
cDNA-SCoT차이현시분석시응용우식물기인차이표체연구적일항신기술.본연구이감자품충계당11호근첨위재료,제취총RNA병반전록제1련cDNA,대영향감자cDNA-SCoT차이현시PCR반응적cDNA모판、SCoT인물、dNTPs、Taq DNA취합매화Mg2+등인자진행우화,건립감자cDNA-SCoT반응체계,동시응용우화후반응체계분리25％PEG6000협박유도감자근첨차이표체기인편단.결과표명:각항인자균대PCR확증효과존재영향,20μL반응체계중각인자적최가함량여하:cDNA 80 ng、인물농도1.0 μmol/L、Taq DNA취합매2.0 U、dNTPs농도200 μmo1/L、Mg2+농도1.8 mmol/L.연구결과환현시,SCoT인물확증다태성봉부,평균매조인물확증조대30조,다태성조대비솔위46.9％,6조인물분리득도PEG유도감자근첨특이표체편단45조,표명본연구소건립적감자cDNA-SCoT반응체계구유조작간편、결과은정、중복성호、성본저、다태성봉부등우점,가위감자기인차이표체연구제공신적기술지지.
