肝脏
肝髒
간장
CHINESE HEPATOLOGY
2013年
6期
374-377,397
,共5页
孙丽杰%赵勇华%李树臣%于建武%康鹏%刘伟
孫麗傑%趙勇華%李樹臣%于建武%康鵬%劉偉
손려걸%조용화%리수신%우건무%강붕%류위
丙型肝炎病毒%核心蛋白%AMP激活蛋白激酶,AMPK%葡萄糖摄取%糖异生
丙型肝炎病毒%覈心蛋白%AMP激活蛋白激酶,AMPK%葡萄糖攝取%糖異生
병형간염병독%핵심단백%AMP격활단백격매,AMPK%포도당섭취%당이생
Hepatitis C viruses%Core protein%AMP-activated protein kinase,AMPK%Glucose uptake%Gluconeogenesis
目的 探讨HCV核心蛋白对AMP激活蛋白激酶(AMPK)表达及肝细胞葡萄糖代谢的影响.方法 表达HCV核心蛋白的质粒转染L02人肝细胞.分别应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量-PCR、Western印迹检测AMPK活性、mRNA及蛋白的表达.应用放射同位素法和葡萄糖氧化酶法测定肝细胞葡萄糖摄取率和糖异生.采用6-磷酸葡萄糖脱氢酶偶联比色法和乳酸脱氢酶偶联比色法测定葡萄糖激酶(GK)和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)活性.RT-PCR检测AMPK下游调节糖代谢的基因的葡萄糖转运蛋白(GLUT)1、GLUT2、PEPCK、葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)和GK mRNA水平.结果 与转染空载体的L02人肝细胞相比,表达HCV核心蛋白L02人肝细胞AMPK α2活性[(0.2±0.05)比(1.0±0.3),t=6.443,P＜0.01]、AMPK α2 mRNA[(0.3±0.05)比(1.0±0.3),t=5.638,P＜0.01]及磷酸化-AMPK蛋白的表达水平[(0.2±0.05)比(0.6±0.2),t=4.753,P＜0.01]明显下降,PEPCK活性[mIU/min/mg蛋白:(35.80±8.70)比(25.50±5.80),t=2.413,P＜0.05]明显升高,而GK活性[mIU/min/mg蛋白:(1.70±0.35)比(3.55±0.84),t =4.929,P＜0.01]明显降低,葡萄糖摄取率[cpm:(5000±800)比(20000±5000),t=7.256,P＜0.01]及其调节基因GLUT2 mRNA水平[(0.5±0.1)比(1±0.3),t=3.873,P＜0.01]明显下降；糖异生[(2.5±0.5)比(1.0±0.2),t =6.823,P＜0.01]及其调节基因PEPCK[(2.8±0.7)比(1.0±0.3),t=5.789,P＜0.01]、G6Pase mRNA水平[(2.5±0.5)比(1.0±0.2),t=6.822,P＜0.01]明显升高；GK mRNA水平[(0.6±0.1)比(0.9±0.3),t=2.324,P＜0.05]明显下降.结论 HCV核心蛋白下调AMPK活性及表达,改变其下游调节糖代谢相关基因表达,降低葡萄糖摄取能力,增加糖异生,导致肝细胞葡萄糖代谢紊乱.
目的 探討HCV覈心蛋白對AMP激活蛋白激酶(AMPK)錶達及肝細胞葡萄糖代謝的影響.方法 錶達HCV覈心蛋白的質粒轉染L02人肝細胞.分彆應用液體閃爍計數儀、實時熒光定量-PCR、Western印跡檢測AMPK活性、mRNA及蛋白的錶達.應用放射同位素法和葡萄糖氧化酶法測定肝細胞葡萄糖攝取率和糖異生.採用6-燐痠葡萄糖脫氫酶偶聯比色法和乳痠脫氫酶偶聯比色法測定葡萄糖激酶(GK)和燐痠烯醇丙酮痠羧激酶(PEPCK)活性.RT-PCR檢測AMPK下遊調節糖代謝的基因的葡萄糖轉運蛋白(GLUT)1、GLUT2、PEPCK、葡萄糖-6-燐痠酶(G6Pase)和GK mRNA水平.結果 與轉染空載體的L02人肝細胞相比,錶達HCV覈心蛋白L02人肝細胞AMPK α2活性[(0.2±0.05)比(1.0±0.3),t=6.443,P＜0.01]、AMPK α2 mRNA[(0.3±0.05)比(1.0±0.3),t=5.638,P＜0.01]及燐痠化-AMPK蛋白的錶達水平[(0.2±0.05)比(0.6±0.2),t=4.753,P＜0.01]明顯下降,PEPCK活性[mIU/min/mg蛋白:(35.80±8.70)比(25.50±5.80),t=2.413,P＜0.05]明顯升高,而GK活性[mIU/min/mg蛋白:(1.70±0.35)比(3.55±0.84),t =4.929,P＜0.01]明顯降低,葡萄糖攝取率[cpm:(5000±800)比(20000±5000),t=7.256,P＜0.01]及其調節基因GLUT2 mRNA水平[(0.5±0.1)比(1±0.3),t=3.873,P＜0.01]明顯下降；糖異生[(2.5±0.5)比(1.0±0.2),t =6.823,P＜0.01]及其調節基因PEPCK[(2.8±0.7)比(1.0±0.3),t=5.789,P＜0.01]、G6Pase mRNA水平[(2.5±0.5)比(1.0±0.2),t=6.822,P＜0.01]明顯升高；GK mRNA水平[(0.6±0.1)比(0.9±0.3),t=2.324,P＜0.05]明顯下降.結論 HCV覈心蛋白下調AMPK活性及錶達,改變其下遊調節糖代謝相關基因錶達,降低葡萄糖攝取能力,增加糖異生,導緻肝細胞葡萄糖代謝紊亂.
목적 탐토HCV핵심단백대AMP격활단백격매(AMPK)표체급간세포포도당대사적영향.방법 표체HCV핵심단백적질립전염L02인간세포.분별응용액체섬삭계수의、실시형광정량-PCR、Western인적검측AMPK활성、mRNA급단백적표체.응용방사동위소법화포도당양화매법측정간세포포도당섭취솔화당이생.채용6-린산포도당탈경매우련비색법화유산탈경매우련비색법측정포도당격매(GK)화린산희순병동산최격매(PEPCK)활성.RT-PCR검측AMPK하유조절당대사적기인적포도당전운단백(GLUT)1、GLUT2、PEPCK、포도당-6-린산매(G6Pase)화GK mRNA수평.결과 여전염공재체적L02인간세포상비,표체HCV핵심단백L02인간세포AMPK α2활성[(0.2±0.05)비(1.0±0.3),t=6.443,P＜0.01]、AMPK α2 mRNA[(0.3±0.05)비(1.0±0.3),t=5.638,P＜0.01]급린산화-AMPK단백적표체수평[(0.2±0.05)비(0.6±0.2),t=4.753,P＜0.01]명현하강,PEPCK활성[mIU/min/mg단백:(35.80±8.70)비(25.50±5.80),t=2.413,P＜0.05]명현승고,이GK활성[mIU/min/mg단백:(1.70±0.35)비(3.55±0.84),t =4.929,P＜0.01]명현강저,포도당섭취솔[cpm:(5000±800)비(20000±5000),t=7.256,P＜0.01]급기조절기인GLUT2 mRNA수평[(0.5±0.1)비(1±0.3),t=3.873,P＜0.01]명현하강；당이생[(2.5±0.5)비(1.0±0.2),t =6.823,P＜0.01]급기조절기인PEPCK[(2.8±0.7)비(1.0±0.3),t=5.789,P＜0.01]、G6Pase mRNA수평[(2.5±0.5)비(1.0±0.2),t=6.822,P＜0.01]명현승고；GK mRNA수평[(0.6±0.1)비(0.9±0.3),t=2.324,P＜0.05]명현하강.결론 HCV핵심단백하조AMPK활성급표체,개변기하유조절당대사상관기인표체,강저포도당섭취능력,증가당이생,도치간세포포도당대사문란.
