高等学校化学学报
高等學校化學學報
고등학교화학학보
CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES
2013年
10期
2334-2339
,共6页
李雁飞%张金祥%谷艳芹%郝倩%曹昊%张应玖
李雁飛%張金祥%穀豔芹%郝倩%曹昊%張應玖
리안비%장금상%곡염근%학천%조호%장응구
多功能淀粉酶%表达%信号肽%结构%功能
多功能澱粉酶%錶達%信號肽%結構%功能
다공능정분매%표체%신호태%결구%공능
Multifunctional amylase%Expression%Signal peptide%Structure%Function
将编码枯草杆菌BS168的amyE信号肽(S)的基因与编码多功能淀粉酶OPMA-N和OPMA-G的基因重组,分别构建了分泌表达多功能淀粉酶OPMA-N和OPMA-G的重组载体pMA5-OPMA-SN和pMA5-OPMA-SG,并分别在枯草杆菌BS168中实现了OPMA-SN和OPMA-SG的有效分泌表达.SDS-PAGE分析表明,该信号肽的引入提高了异源蛋白的分泌量,OPMA-SN和OPMA-SG的分泌水平(53％和67％)比OPMA-N和OPMA-G(45％和58％)明显提高,但此信号肽在分泌表达OPMA-N或OPMA-G后不能被有效切除.活力分析表明,OPMA-SN(5.17 U/mg)和OPMA-N(4.57 U/mg)的活力水平与分泌水平一致,但OPMA-SG(4.50U/mg)和OPMA-G(4.65 U/mg)的活力水平却与分泌水平呈反相关性.通过分析OPMA-SN和OPMA-SG分子的空间构象发现,信号肽的存在不影响OPMA-N的活性部位构象,但影响OPMA-G的活性部位构象,从而导致OPOMA-G的催化活性下降.
將編碼枯草桿菌BS168的amyE信號肽(S)的基因與編碼多功能澱粉酶OPMA-N和OPMA-G的基因重組,分彆構建瞭分泌錶達多功能澱粉酶OPMA-N和OPMA-G的重組載體pMA5-OPMA-SN和pMA5-OPMA-SG,併分彆在枯草桿菌BS168中實現瞭OPMA-SN和OPMA-SG的有效分泌錶達.SDS-PAGE分析錶明,該信號肽的引入提高瞭異源蛋白的分泌量,OPMA-SN和OPMA-SG的分泌水平(53％和67％)比OPMA-N和OPMA-G(45％和58％)明顯提高,但此信號肽在分泌錶達OPMA-N或OPMA-G後不能被有效切除.活力分析錶明,OPMA-SN(5.17 U/mg)和OPMA-N(4.57 U/mg)的活力水平與分泌水平一緻,但OPMA-SG(4.50U/mg)和OPMA-G(4.65 U/mg)的活力水平卻與分泌水平呈反相關性.通過分析OPMA-SN和OPMA-SG分子的空間構象髮現,信號肽的存在不影響OPMA-N的活性部位構象,但影響OPMA-G的活性部位構象,從而導緻OPOMA-G的催化活性下降.
장편마고초간균BS168적amyE신호태(S)적기인여편마다공능정분매OPMA-N화OPMA-G적기인중조,분별구건료분비표체다공능정분매OPMA-N화OPMA-G적중조재체pMA5-OPMA-SN화pMA5-OPMA-SG,병분별재고초간균BS168중실현료OPMA-SN화OPMA-SG적유효분비표체.SDS-PAGE분석표명,해신호태적인입제고료이원단백적분비량,OPMA-SN화OPMA-SG적분비수평(53％화67％)비OPMA-N화OPMA-G(45％화58％)명현제고,단차신호태재분비표체OPMA-N혹OPMA-G후불능피유효절제.활력분석표명,OPMA-SN(5.17 U/mg)화OPMA-N(4.57 U/mg)적활력수평여분비수평일치,단OPMA-SG(4.50U/mg)화OPMA-G(4.65 U/mg)적활력수평각여분비수평정반상관성.통과분석OPMA-SN화OPMA-SG분자적공간구상발현,신호태적존재불영향OPMA-N적활성부위구상,단영향OPMA-G적활성부위구상,종이도치OPOMA-G적최화활성하강.
