CAJ | 학술논문

目的:利用自然衰老雄性SD大鼠和D-半乳糖(D-Gal)诱导的细胞衰老模型,研究在衰老细胞中线粒体顺乌头酸酶(mitochondrial aconitase,ACO2)活性的变化及其对能量合成的影响.方法:利用55 mmol/L D-Gal诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5衰老,并采用蔗糖连续密度梯度离心法分离大鼠脑组织和MRC-5细胞的线粒体；ACO2活性根据反应产物NADPH在340 nm的吸光度变化率进行检测,其表达水平分析分别用荧光定量PCR和Western blotting完成；利用试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量以反映细胞氧化还原状态；组织铁含量的检测则通过菲咯嗪法进行；线粒体膜电位及腺苷酸含量分别应用JC-1荧光探针法和高效液相色谱法检测,并计算能荷.结果:随着大鼠月龄增加,ACO2活性逐渐下降,表达水平无明显差异,组织铁水平逐渐升高；体外氧化应激实验显示ACO2活性随H2O2处理浓度和时间增加而下降；细胞衰老模型中,SOD活性降低,MDA含量升高,ACO2活性下降而表达水平未变；自然衰老大鼠和细胞衰老模型中,线粒体膜电位、ATP合成与能荷呈明显下降趋势.结论:衰老过程中,随着氧化压力增加,氧化应激敏感的ACO2活性下降,影响三羧酸循环效率,同时伴线粒体膜电位下降,进而使得能量合成降低.
목적:이용자연쇠로웅성SD대서화D-반유당(D-Gal)유도적세포쇠로모형,연구재쇠로세포중선립체순오두산매(mitochondrial aconitase,ACO2)활성적변화급기대능량합성적영향.방법:이용55 mmol/L D-Gal유도인배폐성섬유세포MRC-5쇠로,병채용자당련속밀도제도리심법분리대서뇌조직화MRC-5세포적선립체；ACO2활성근거반응산물NADPH재340 nm적흡광도변화솔진행검측,기표체수평분석분별용형광정량PCR화Western blotting완성；이용시제합검측세포초양화물기화매(SOD)활성화병이철(MDA)함량이반영세포양화환원상태；조직철함량적검측칙통과비각진법진행；선립체막전위급선감산함량분별응용JC-1형광탐침법화고효액상색보법검측,병계산능하.결과:수착대서월령증가,ACO2활성축점하강,표체수평무명현차이,조직철수평축점승고；체외양화응격실험현시ACO2활성수H2O2처리농도화시간증가이하강；세포쇠로모형중,SOD활성강저,MDA함량승고,ACO2활성하강이표체수평미변；자연쇠로대서화세포쇠로모형중,선립체막전위、ATP합성여능하정명현하강추세.결론:쇠로과정중,수착양화압력증가,양화응격민감적ACO2활성하강,영향삼최산순배효솔,동시반선립체막전위하강,진이사득능량합성강저.