广东药学院学报
廣東藥學院學報
엄동약학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY
2013年
4期
439-442
,共4页
沈秉正%宋金春%彭燕%李荣凌
瀋秉正%宋金春%彭燕%李榮凌
침병정%송금춘%팽연%리영릉
SMB-1金属β-内酰胺酶%原核表达%酶活性
SMB-1金屬β-內酰胺酶%原覈錶達%酶活性
SMB-1금속β-내선알매%원핵표체%매활성
目的 原核表达SMB-1型金属β-内酰胺酶,并研究其水解β-内酰胺类抗生素的活性.方法利用化学合成方法合成blaSMB-1基因,经PCR扩增后克隆至pET28a载体,构建重组的原核表达质粒pET28a-SMB-1,转化至E.coli BL21(DE3),诱导表达.表达的重组蛋白经Ni2+-NTA纯化后,测定其水解底物时的酶促反应动力学参数及最适pH值和温度.结果重组质粒经测序证明其正确性;表达的重组蛋白相对分子质量约为33 000,纯化后蛋白的质量浓度为0.20 mg/mL,该酶对本实验中除氨曲南外的所有β-内酰胺类抗生素均具有较高水解活性,其最适pH值为8.0,最适温度为40 ℃.结论 利用工程菌E.coli BL21(DE3)-pET28a-SMB-1成功实现了SMB-1型金属β-内酰胺酶的原核表达,为深入研究其生物学功能及作用机制提供了物质基础,同时也为研发该酶的抑制剂提供了靶标物质.
目的 原覈錶達SMB-1型金屬β-內酰胺酶,併研究其水解β-內酰胺類抗生素的活性.方法利用化學閤成方法閤成blaSMB-1基因,經PCR擴增後剋隆至pET28a載體,構建重組的原覈錶達質粒pET28a-SMB-1,轉化至E.coli BL21(DE3),誘導錶達.錶達的重組蛋白經Ni2+-NTA純化後,測定其水解底物時的酶促反應動力學參數及最適pH值和溫度.結果重組質粒經測序證明其正確性;錶達的重組蛋白相對分子質量約為33 000,純化後蛋白的質量濃度為0.20 mg/mL,該酶對本實驗中除氨麯南外的所有β-內酰胺類抗生素均具有較高水解活性,其最適pH值為8.0,最適溫度為40 ℃.結論 利用工程菌E.coli BL21(DE3)-pET28a-SMB-1成功實現瞭SMB-1型金屬β-內酰胺酶的原覈錶達,為深入研究其生物學功能及作用機製提供瞭物質基礎,同時也為研髮該酶的抑製劑提供瞭靶標物質.
목적 원핵표체SMB-1형금속β-내선알매,병연구기수해β-내선알류항생소적활성.방법이용화학합성방법합성blaSMB-1기인,경PCR확증후극륭지pET28a재체,구건중조적원핵표체질립pET28a-SMB-1,전화지E.coli BL21(DE3),유도표체.표체적중조단백경Ni2+-NTA순화후,측정기수해저물시적매촉반응동역학삼수급최괄pH치화온도.결과중조질립경측서증명기정학성;표체적중조단백상대분자질량약위33 000,순화후단백적질량농도위0.20 mg/mL,해매대본실험중제안곡남외적소유β-내선알류항생소균구유교고수해활성,기최괄pH치위8.0,최괄온도위40 ℃.결론 이용공정균E.coli BL21(DE3)-pET28a-SMB-1성공실현료SMB-1형금속β-내선알매적원핵표체,위심입연구기생물학공능급작용궤제제공료물질기출,동시야위연발해매적억제제제공료파표물질.
