徐州医学院学报
徐州醫學院學報
서주의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE XUZHOU
2013年
8期
511-515
,共5页
张青%李彩红%杨洁%李慧忠%裴冬生%郑骏年
張青%李綵紅%楊潔%李慧忠%裴鼕生%鄭駿年
장청%리채홍%양길%리혜충%배동생%정준년
嵌合抗原受体%肿瘤免疫治疗%G250%慢病毒%T细胞
嵌閤抗原受體%腫瘤免疫治療%G250%慢病毒%T細胞
감합항원수체%종류면역치료%G250%만병독%T세포
目的 构建嵌合抗原受体G250-CD8-28BBZ的慢病毒表达质粒,并研究该嵌合抗原受体在T细胞中的表达.方法 利用常规分子克隆技术将编码Igκ信号肽、抗G250单链抗体及信号结构CD8-28BBZ的编码序列拼接起来,并将得到的融合基因片段插入慢病毒表达载体pLVX-IRES-ZsGreen中,采用酶切及测序鉴定.慢病毒感染T细胞后,通过荧光显微镜、Western blot、流式细胞术检测G250-CD8-28BBZ在T细胞中的表达.结果 双酶切及测序结果显示重组质粒pLVX-G250-CD8-28BBZ构建正确;慢病毒感染后的T细胞能发出绿色荧光;T细胞表达的G250-CD8-28BBZ分子大小正确;慢病毒感染2周后,G250-CD8-28BBZ在T细胞中的阳性表达率为45.2%.结论 成功构建了嵌合抗原受体G250-CD8-28BBZ的慢病毒表达质粒,该嵌合抗原受体能够在T细胞内高效稳定表达.
目的 構建嵌閤抗原受體G250-CD8-28BBZ的慢病毒錶達質粒,併研究該嵌閤抗原受體在T細胞中的錶達.方法 利用常規分子剋隆技術將編碼Igκ信號肽、抗G250單鏈抗體及信號結構CD8-28BBZ的編碼序列拼接起來,併將得到的融閤基因片段插入慢病毒錶達載體pLVX-IRES-ZsGreen中,採用酶切及測序鑒定.慢病毒感染T細胞後,通過熒光顯微鏡、Western blot、流式細胞術檢測G250-CD8-28BBZ在T細胞中的錶達.結果 雙酶切及測序結果顯示重組質粒pLVX-G250-CD8-28BBZ構建正確;慢病毒感染後的T細胞能髮齣綠色熒光;T細胞錶達的G250-CD8-28BBZ分子大小正確;慢病毒感染2週後,G250-CD8-28BBZ在T細胞中的暘性錶達率為45.2%.結論 成功構建瞭嵌閤抗原受體G250-CD8-28BBZ的慢病毒錶達質粒,該嵌閤抗原受體能夠在T細胞內高效穩定錶達.
목적 구건감합항원수체G250-CD8-28BBZ적만병독표체질립,병연구해감합항원수체재T세포중적표체.방법 이용상규분자극륭기술장편마Igκ신호태、항G250단련항체급신호결구CD8-28BBZ적편마서렬병접기래,병장득도적융합기인편단삽입만병독표체재체pLVX-IRES-ZsGreen중,채용매절급측서감정.만병독감염T세포후,통과형광현미경、Western blot、류식세포술검측G250-CD8-28BBZ재T세포중적표체.결과 쌍매절급측서결과현시중조질립pLVX-G250-CD8-28BBZ구건정학;만병독감염후적T세포능발출록색형광;T세포표체적G250-CD8-28BBZ분자대소정학;만병독감염2주후,G250-CD8-28BBZ재T세포중적양성표체솔위45.2%.결론 성공구건료감합항원수체G250-CD8-28BBZ적만병독표체질립,해감합항원수체능구재T세포내고효은정표체.
