广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2013年
15期
2288-2292
,共5页
梅毅%张定国%王立生%朱忠生
梅毅%張定國%王立生%硃忠生
매의%장정국%왕립생%주충생
长双歧杆菌%绿色荧光蛋白基因%γ干扰素诱导蛋白10
長雙歧桿菌%綠色熒光蛋白基因%γ榦擾素誘導蛋白10
장쌍기간균%록색형광단백기인%γ간우소유도단백10
目的 构建并鉴定携带人γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)基因的大肠杆菌-双歧杆菌穿梭分泌型表达载体,探索抗肿瘤基因治疗的新型载体.方法 用改良型MRS双歧杆菌选择培养基,从人新鲜粪便分离长双歧杆菌,通过PCR方法克隆双歧杆菌的内源性阿拉伯糖苷酶的启动子和分泌性信号肽DNA序列(ara).然后以大肠杆菌质粒pBAD-A和pBS-T为基础,以ara启动子取代原有的启动子,以绿色荧光蛋白基因(GFP)作为报告基因,构建大肠杆菌-双歧杆菌穿梭质粒pBS-BPP-ara-GFP.通过PCR方法扩增真核表达载体pBLAST49-hIP-10质粒中的IP-10基因,将其克隆到穿梭质粒pBS-BPP-ara-GFP中,采用电转化法将正确克隆的大肠杆菌-双歧杆菌穿梭质粒导入双歧杆菌中,并以L-arabinose诱导表达.在激光共聚焦显微镜下观察转基因双歧杆菌中GFP蛋白的表达;运用免疫蛋白质印迹(Western blot)检测转基因双歧杆菌中IP-10的蛋白表达水平.结果 含GFP基因的转基因双歧杆菌在激光共聚焦显微镜下观察到绿色荧光.含IP-10基因的转基因双歧杆菌经Western blot检测到分子量为8.47 kD的目的 蛋白条带.结论 成功构建能表达IP-10蛋白的穿梭质粒载体pBS-BPP-ara-GFP-IP-10,为IP-10转基因双歧杆菌的抗肿瘤机制及其抑瘤效应的研究奠定基础.
目的 構建併鑒定攜帶人γ榦擾素誘導蛋白10(IP-10)基因的大腸桿菌-雙歧桿菌穿梭分泌型錶達載體,探索抗腫瘤基因治療的新型載體.方法 用改良型MRS雙歧桿菌選擇培養基,從人新鮮糞便分離長雙歧桿菌,通過PCR方法剋隆雙歧桿菌的內源性阿拉伯糖苷酶的啟動子和分泌性信號肽DNA序列(ara).然後以大腸桿菌質粒pBAD-A和pBS-T為基礎,以ara啟動子取代原有的啟動子,以綠色熒光蛋白基因(GFP)作為報告基因,構建大腸桿菌-雙歧桿菌穿梭質粒pBS-BPP-ara-GFP.通過PCR方法擴增真覈錶達載體pBLAST49-hIP-10質粒中的IP-10基因,將其剋隆到穿梭質粒pBS-BPP-ara-GFP中,採用電轉化法將正確剋隆的大腸桿菌-雙歧桿菌穿梭質粒導入雙歧桿菌中,併以L-arabinose誘導錶達.在激光共聚焦顯微鏡下觀察轉基因雙歧桿菌中GFP蛋白的錶達;運用免疫蛋白質印跡(Western blot)檢測轉基因雙歧桿菌中IP-10的蛋白錶達水平.結果 含GFP基因的轉基因雙歧桿菌在激光共聚焦顯微鏡下觀察到綠色熒光.含IP-10基因的轉基因雙歧桿菌經Western blot檢測到分子量為8.47 kD的目的 蛋白條帶.結論 成功構建能錶達IP-10蛋白的穿梭質粒載體pBS-BPP-ara-GFP-IP-10,為IP-10轉基因雙歧桿菌的抗腫瘤機製及其抑瘤效應的研究奠定基礎.
목적 구건병감정휴대인γ간우소유도단백10(IP-10)기인적대장간균-쌍기간균천사분비형표체재체,탐색항종류기인치료적신형재체.방법 용개량형MRS쌍기간균선택배양기,종인신선분편분리장쌍기간균,통과PCR방법극륭쌍기간균적내원성아랍백당감매적계동자화분비성신호태DNA서렬(ara).연후이대장간균질립pBAD-A화pBS-T위기출,이ara계동자취대원유적계동자,이록색형광단백기인(GFP)작위보고기인,구건대장간균-쌍기간균천사질립pBS-BPP-ara-GFP.통과PCR방법확증진핵표체재체pBLAST49-hIP-10질립중적IP-10기인,장기극륭도천사질립pBS-BPP-ara-GFP중,채용전전화법장정학극륭적대장간균-쌍기간균천사질립도입쌍기간균중,병이L-arabinose유도표체.재격광공취초현미경하관찰전기인쌍기간균중GFP단백적표체;운용면역단백질인적(Western blot)검측전기인쌍기간균중IP-10적단백표체수평.결과 함GFP기인적전기인쌍기간균재격광공취초현미경하관찰도록색형광.함IP-10기인적전기인쌍기간균경Western blot검측도분자량위8.47 kD적목적 단백조대.결론 성공구건능표체IP-10단백적천사질립재체pBS-BPP-ara-GFP-IP-10,위IP-10전기인쌍기간균적항종류궤제급기억류효응적연구전정기출.
