作物学报
作物學報
작물학보
ACTA AGRONOMICA SINICA
2013年
7期
1164-1171
,共8页
佟祥超%王丽曼%胡文静%张雪颖%张天真%郭旺珍
佟祥超%王麗曼%鬍文靜%張雪穎%張天真%郭旺珍
동상초%왕려만%호문정%장설영%장천진%곽왕진
GDSL脂肪酶%克隆%表达%基因定位%关联分析%棉花
GDSL脂肪酶%剋隆%錶達%基因定位%關聯分析%棉花
GDSL지방매%극륭%표체%기인정위%관련분석%면화
GDSL lipase%Cloning%Expression%Gene mapping%Association analysis%Cotton
GDSL脂肪酶与GXSXG脂肪酶是2个重要的脂肪酶亚家族.其中,GDSL家族脂肪酶具有水解酶活性,能水解多种酯类物质.本试验根据新乡小吉无绒无絮(XinWX)和无绒有絮(XinFLM)近等基因系纤维起始期29K芯片竞争杂交结果,选择了一个在纤维起始期具有极显著表达差异的EST序列(GenBank登录号为DR458916),以该序列信息为探针,利用电子克隆方法并进行cDNA及基因组全长基因PCR扩增、测序验证,克隆获得一个陆地棉GDSL脂肪酶基因(GhGDSL; GenBank登录号为KC186125).该基因ORF长1065 bp,编码354个氨基酸,含有5个外显子和4个内含子.该基因在二倍体棉种基因组中含一个拷贝,在四倍体棉种基因组中含2个拷贝.序列比对显示该基因在四倍体棉种的2个亚组中独立进化,且D亚组比A亚组变异大.染色体定位显示该基因2个拷贝分别位于A4 (Chr.4)和D4 (Chr.22)染色体上.定量RT-PCR结果表明,GhGDSL在开花后3~10 d的纤维组织中表达量高,其中在海7124中表达高峰在8DPA,在TM-1中表达高峰从5DPA持续到10DPA.利用[(TM-1×Hai7124)×TM-1]的BC1S1群体开展Gh GDSL功能与纤维、种子品质性状关联分析,发现该基因A亚组的拷贝与种子脂肪含量存在显著相关(P=0.048);D亚组的拷贝与种子蛋白含量存在极显著相关(P=0.008).推测Gh GDSL基因功能与种子中脂肪、蛋白代谢相关,同时也参与纤维伸长过程.
GDSL脂肪酶與GXSXG脂肪酶是2箇重要的脂肪酶亞傢族.其中,GDSL傢族脂肪酶具有水解酶活性,能水解多種酯類物質.本試驗根據新鄉小吉無絨無絮(XinWX)和無絨有絮(XinFLM)近等基因繫纖維起始期29K芯片競爭雜交結果,選擇瞭一箇在纖維起始期具有極顯著錶達差異的EST序列(GenBank登錄號為DR458916),以該序列信息為探針,利用電子剋隆方法併進行cDNA及基因組全長基因PCR擴增、測序驗證,剋隆穫得一箇陸地棉GDSL脂肪酶基因(GhGDSL; GenBank登錄號為KC186125).該基因ORF長1065 bp,編碼354箇氨基痠,含有5箇外顯子和4箇內含子.該基因在二倍體棉種基因組中含一箇拷貝,在四倍體棉種基因組中含2箇拷貝.序列比對顯示該基因在四倍體棉種的2箇亞組中獨立進化,且D亞組比A亞組變異大.染色體定位顯示該基因2箇拷貝分彆位于A4 (Chr.4)和D4 (Chr.22)染色體上.定量RT-PCR結果錶明,GhGDSL在開花後3~10 d的纖維組織中錶達量高,其中在海7124中錶達高峰在8DPA,在TM-1中錶達高峰從5DPA持續到10DPA.利用[(TM-1×Hai7124)×TM-1]的BC1S1群體開展Gh GDSL功能與纖維、種子品質性狀關聯分析,髮現該基因A亞組的拷貝與種子脂肪含量存在顯著相關(P=0.048);D亞組的拷貝與種子蛋白含量存在極顯著相關(P=0.008).推測Gh GDSL基因功能與種子中脂肪、蛋白代謝相關,同時也參與纖維伸長過程.
GDSL지방매여GXSXG지방매시2개중요적지방매아가족.기중,GDSL가족지방매구유수해매활성,능수해다충지류물질.본시험근거신향소길무융무서(XinWX)화무융유서(XinFLM)근등기인계섬유기시기29K심편경쟁잡교결과,선택료일개재섬유기시기구유겁현저표체차이적EST서렬(GenBank등록호위DR458916),이해서렬신식위탐침,이용전자극륭방법병진행cDNA급기인조전장기인PCR확증、측서험증,극륭획득일개륙지면GDSL지방매기인(GhGDSL; GenBank등록호위KC186125).해기인ORF장1065 bp,편마354개안기산,함유5개외현자화4개내함자.해기인재이배체면충기인조중함일개고패,재사배체면충기인조중함2개고패.서렬비대현시해기인재사배체면충적2개아조중독립진화,차D아조비A아조변이대.염색체정위현시해기인2개고패분별위우A4 (Chr.4)화D4 (Chr.22)염색체상.정량RT-PCR결과표명,GhGDSL재개화후3~10 d적섬유조직중표체량고,기중재해7124중표체고봉재8DPA,재TM-1중표체고봉종5DPA지속도10DPA.이용[(TM-1×Hai7124)×TM-1]적BC1S1군체개전Gh GDSL공능여섬유、충자품질성상관련분석,발현해기인A아조적고패여충자지방함량존재현저상관(P=0.048);D아조적고패여충자단백함량존재겁현저상관(P=0.008).추측Gh GDSL기인공능여충자중지방、단백대사상관,동시야삼여섬유신장과정.