青岛农业大学学报（自然科学版）
青島農業大學學報（自然科學版）
청도농업대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF QINGDAO AGRICULTURAL UNIVERSITY
2013年
2期
114-117,123
,共5页
茶花%CjAPL1基因%干扰表达%载体构建%遗传转化
茶花%CjAPL1基因%榦擾錶達%載體構建%遺傳轉化
다화%CjAPL1기인%간우표체%재체구건%유전전화
Camellia japonica%CjAPL 1 gene%RNA interference expression%vector construction%genetic transformation
茶花CjAPL1基因是MADS-box基因家族的AP1同源基因,AP1基因对于植物花器官的发育具有重要调控功能.本实验选取CjAPL1基因中长度为292bp的基因干扰片段,采用双酶切方法构建了有反向重复序列的RNA干扰中间载体pUCC-CjAPL1.分别用Pst Ⅰ单酶切pUCC-CjAPL1中间载体和pCAMBIA1300植物表达载体,将有反向重复序列的小片段与pCAMBIA1300大片段连接,得到最终植物干扰表达载体pCAMRNAi-CjAPL1.采用热激法转化农杆菌GV3101,花序浸染法转化野生型拟南芥植株.利用潮霉素筛选阳性植株,进一步进行PCR扩增验证和表型观察统计.结果表明,pCAMRNAi-CjAPL1表达载体构建完整,且干扰载体成功地导入拟南芥基因组中.转基因植株表现出雄蕊缺失1～2枚的花型变化,证明CjAPL1基因对于雄蕊等花器官的发育起到了调控作用.
茶花CjAPL1基因是MADS-box基因傢族的AP1同源基因,AP1基因對于植物花器官的髮育具有重要調控功能.本實驗選取CjAPL1基因中長度為292bp的基因榦擾片段,採用雙酶切方法構建瞭有反嚮重複序列的RNA榦擾中間載體pUCC-CjAPL1.分彆用Pst Ⅰ單酶切pUCC-CjAPL1中間載體和pCAMBIA1300植物錶達載體,將有反嚮重複序列的小片段與pCAMBIA1300大片段連接,得到最終植物榦擾錶達載體pCAMRNAi-CjAPL1.採用熱激法轉化農桿菌GV3101,花序浸染法轉化野生型擬南芥植株.利用潮黴素篩選暘性植株,進一步進行PCR擴增驗證和錶型觀察統計.結果錶明,pCAMRNAi-CjAPL1錶達載體構建完整,且榦擾載體成功地導入擬南芥基因組中.轉基因植株錶現齣雄蕊缺失1～2枚的花型變化,證明CjAPL1基因對于雄蕊等花器官的髮育起到瞭調控作用.
다화CjAPL1기인시MADS-box기인가족적AP1동원기인,AP1기인대우식물화기관적발육구유중요조공공능.본실험선취CjAPL1기인중장도위292bp적기인간우편단,채용쌍매절방법구건료유반향중복서렬적RNA간우중간재체pUCC-CjAPL1.분별용Pst Ⅰ단매절pUCC-CjAPL1중간재체화pCAMBIA1300식물표체재체,장유반향중복서렬적소편단여pCAMBIA1300대편단련접,득도최종식물간우표체재체pCAMRNAi-CjAPL1.채용열격법전화농간균GV3101,화서침염법전화야생형의남개식주.이용조매소사선양성식주,진일보진행PCR확증험증화표형관찰통계.결과표명,pCAMRNAi-CjAPL1표체재체구건완정,차간우재체성공지도입의남개기인조중.전기인식주표현출웅예결실1～2매적화형변화,증명CjAPL1기인대우웅예등화기관적발육기도료조공작용.
