中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2013年
8期
673-677,696
,共6页
李旭%李岩%程世孝%李雷明%孟凡贺%王立国%王军%范广宇
李旭%李巖%程世孝%李雷明%孟凡賀%王立國%王軍%範廣宇
리욱%리암%정세효%리뢰명%맹범하%왕입국%왕군%범엄우
Livin%骨肉瘤%肿瘤发生%耐药性
Livin%骨肉瘤%腫瘤髮生%耐藥性
Livin%골육류%종류발생%내약성
Livin%osteosarcoma%tumorigenesis%drug resistance
目的 探讨凋亡抑制蛋白(IAP)家族新成员Livin基因在骨肉瘤形成以及多药耐药过程中的作用.方法 应用亚克隆技术构建Livin基因短发夹RNA(shRNA)表达载体,稳定转染并筛选沉默Livin表达的克隆.细胞克隆形成法测定阳性克隆的非贴附性生长状态.流式细胞计数法测量Livin表达短期沉默后细胞周期和顺铂化疗敏感性的变化,以及长期沉默后的Hoechst33258核染色情况.Western blot检测Cyclin D1、Bcl-2、Bax、活化型Caspase-3和多聚ADP核糖多聚酶的表达变化.结果 在骨肉瘤U2-OS细胞中,shRNA介导了Livin mRNA和蛋白水平的下调,细胞克隆形成能力明显下降.在Livin表达沉默早期,处于G0/G1期细胞增加,Cyclin D1的表达减弱,对顺铂药物敏感性增强；长期沉默后凋亡小体形成,Bcl-2蛋白的表达下调,Bax、活化型Caspase-3和PARP的表达上调.结论 凋亡抑制蛋白Livin不但促进骨肉瘤的发生而且促进顺铂化疗耐药性的形成.
目的 探討凋亡抑製蛋白(IAP)傢族新成員Livin基因在骨肉瘤形成以及多藥耐藥過程中的作用.方法 應用亞剋隆技術構建Livin基因短髮夾RNA(shRNA)錶達載體,穩定轉染併篩選沉默Livin錶達的剋隆.細胞剋隆形成法測定暘性剋隆的非貼附性生長狀態.流式細胞計數法測量Livin錶達短期沉默後細胞週期和順鉑化療敏感性的變化,以及長期沉默後的Hoechst33258覈染色情況.Western blot檢測Cyclin D1、Bcl-2、Bax、活化型Caspase-3和多聚ADP覈糖多聚酶的錶達變化.結果 在骨肉瘤U2-OS細胞中,shRNA介導瞭Livin mRNA和蛋白水平的下調,細胞剋隆形成能力明顯下降.在Livin錶達沉默早期,處于G0/G1期細胞增加,Cyclin D1的錶達減弱,對順鉑藥物敏感性增彊；長期沉默後凋亡小體形成,Bcl-2蛋白的錶達下調,Bax、活化型Caspase-3和PARP的錶達上調.結論 凋亡抑製蛋白Livin不但促進骨肉瘤的髮生而且促進順鉑化療耐藥性的形成.
목적 탐토조망억제단백(IAP)가족신성원Livin기인재골육류형성이급다약내약과정중적작용.방법 응용아극륭기술구건Livin기인단발협RNA(shRNA)표체재체,은정전염병사선침묵Livin표체적극륭.세포극륭형성법측정양성극륭적비첩부성생장상태.류식세포계수법측량Livin표체단기침묵후세포주기화순박화료민감성적변화,이급장기침묵후적Hoechst33258핵염색정황.Western blot검측Cyclin D1、Bcl-2、Bax、활화형Caspase-3화다취ADP핵당다취매적표체변화.결과 재골육류U2-OS세포중,shRNA개도료Livin mRNA화단백수평적하조,세포극륭형성능력명현하강.재Livin표체침묵조기,처우G0/G1기세포증가,Cyclin D1적표체감약,대순박약물민감성증강；장기침묵후조망소체형성,Bcl-2단백적표체하조,Bax、활화형Caspase-3화PARP적표체상조.결론 조망억제단백Livin불단촉진골육류적발생이차촉진순박화료내약성적형성.
