胃肠病学和肝病学杂志
胃腸病學和肝病學雜誌
위장병학화간병학잡지
CHINESE JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY AND HEPATOLOGY
2013年
8期
789-792
,共4页
肝炎病毒%启动子%病毒核心蛋白质类%基质金属蛋白酶组织抑制因子-1%转录
肝炎病毒%啟動子%病毒覈心蛋白質類%基質金屬蛋白酶組織抑製因子-1%轉錄
간염병독%계동자%병독핵심단백질류%기질금속단백매조직억제인자-1%전록
Hepacivirus%Promoter%Viral coreproteins%Tissue inhibitor of metalloproteinases-1%Transcrption
目的 研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1基因表达的影响,以探讨HCV的致肝纤维化机制.方法 聚合酶链反应(PCR)扩增TIMP-1的启动子DNA片段,克隆至真核报告载体pCAT3-basic中,构建pCAT3-TIMP-1p报告载体;将该质粒转染人肝癌细胞系HepG2细胞,以酶链免疫吸附试验(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;将构建的pCAT3-TIMP-1p与HCV核心蛋白真核表达载体PcDNA3.1(-)-HCVcore共转染人人肝星状细胞系LX-2细胞,同时平行设立pCAT3-basic阴性对照组、pCAT3-control阳性对照组、pCAT3-TIMP-1p单独转染组,用ELISA法检测各组CAT的表达活性.结果 成功获得TIMP-1基因启动子DNA片段,构建的pCAT3-TIMP-1p具有转录活性,与PcDNA3.1(-)-HCVcore共转染LX-2细胞后,ELISA法检测结果显示pCAT3-TIMP-1p吸光度值为0.833±0.040,同期单独转染LX-2细胞的pCAT3-TIMP-1p吸光度值为0.677±0.049,方差分析各组差异有统计学意义(F=132.401,P＜0.05).结论 HCV核心蛋白通过上调TIMP-1启动子的活性,促进TIMP-1基因的表达.
目的 研究丙型肝炎病毒(HCV)覈心蛋白對基質金屬蛋白酶組織抑製因子(TIMP)-1基因錶達的影響,以探討HCV的緻肝纖維化機製.方法 聚閤酶鏈反應(PCR)擴增TIMP-1的啟動子DNA片段,剋隆至真覈報告載體pCAT3-basic中,構建pCAT3-TIMP-1p報告載體;將該質粒轉染人肝癌細胞繫HepG2細胞,以酶鏈免疫吸附試驗(ELISA)檢測氯黴素乙酰轉移酶(CAT)的錶達活性;將構建的pCAT3-TIMP-1p與HCV覈心蛋白真覈錶達載體PcDNA3.1(-)-HCVcore共轉染人人肝星狀細胞繫LX-2細胞,同時平行設立pCAT3-basic陰性對照組、pCAT3-control暘性對照組、pCAT3-TIMP-1p單獨轉染組,用ELISA法檢測各組CAT的錶達活性.結果 成功穫得TIMP-1基因啟動子DNA片段,構建的pCAT3-TIMP-1p具有轉錄活性,與PcDNA3.1(-)-HCVcore共轉染LX-2細胞後,ELISA法檢測結果顯示pCAT3-TIMP-1p吸光度值為0.833±0.040,同期單獨轉染LX-2細胞的pCAT3-TIMP-1p吸光度值為0.677±0.049,方差分析各組差異有統計學意義(F=132.401,P＜0.05).結論 HCV覈心蛋白通過上調TIMP-1啟動子的活性,促進TIMP-1基因的錶達.
목적 연구병형간염병독(HCV)핵심단백대기질금속단백매조직억제인자(TIMP)-1기인표체적영향,이탐토HCV적치간섬유화궤제.방법 취합매련반응(PCR)확증TIMP-1적계동자DNA편단,극륭지진핵보고재체pCAT3-basic중,구건pCAT3-TIMP-1p보고재체;장해질립전염인간암세포계HepG2세포,이매련면역흡부시험(ELISA)검측록매소을선전이매(CAT)적표체활성;장구건적pCAT3-TIMP-1p여HCV핵심단백진핵표체재체PcDNA3.1(-)-HCVcore공전염인인간성상세포계LX-2세포,동시평행설립pCAT3-basic음성대조조、pCAT3-control양성대조조、pCAT3-TIMP-1p단독전염조,용ELISA법검측각조CAT적표체활성.결과 성공획득TIMP-1기인계동자DNA편단,구건적pCAT3-TIMP-1p구유전록활성,여PcDNA3.1(-)-HCVcore공전염LX-2세포후,ELISA법검측결과현시pCAT3-TIMP-1p흡광도치위0.833±0.040,동기단독전염LX-2세포적pCAT3-TIMP-1p흡광도치위0.677±0.049,방차분석각조차이유통계학의의(F=132.401,P＜0.05).결론 HCV핵심단백통과상조TIMP-1계동자적활성,촉진TIMP-1기인적표체.
