分析化学
分析化學
분석화학
CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY
2013年
8期
1165-1170
,共6页
唐晓闻%李桂梅%邹秉杰%刘敏%周国华
唐曉聞%李桂梅%鄒秉傑%劉敏%週國華
당효문%리계매%추병걸%류민%주국화
连接反应%基因表达量%高度降解RNA%实时荧光定量PCR%石蜡包埋组织样本
連接反應%基因錶達量%高度降解RNA%實時熒光定量PCR%石蠟包埋組織樣本
련접반응%기인표체량%고도강해RNA%실시형광정량PCR%석사포매조직양본
Ligation%Gene expression%Highly degraded ribonucleic acid%Real-time quantitative polymerase chain reaction%Paraffin-embedded tissue samples
许多生物样本(如石蜡包埋组织样本)中的mRNA易断裂为小片段,利用传统方法检测较困难.为了测定高度降解的mRNA,本研究针对待测mRNA短片段设计一对探针,当探针与待测模板杂交后,通过连接反应将两条探针5′与3′端相连,连接产物作为PCR扩增模板进行实时荧光定量检测,从而对待测mRNA进行定量测定.以人ACTB基因为待测靶标,通过测定不同浓度的待测靶标及与待测靶标序列不同的RNA片段,分别考察方法的灵敏度与特异性,并检测肺癌石蜡切片样本中ACTB基因的表达量,与传统的反转录定量PCR检测结果进行了对比.本方法的检出限为150 fmol/L,定量线性范围为150 fmol/L～300 pmol/L,并且具有良好的特异性.在对石蜡包埋组织样本中的基因表达量检测时,本方法扩增检测CT值比反转录实时定量PCR小,表明本方法更适合对高度降解的mRNA样本进行定量测定.
許多生物樣本(如石蠟包埋組織樣本)中的mRNA易斷裂為小片段,利用傳統方法檢測較睏難.為瞭測定高度降解的mRNA,本研究針對待測mRNA短片段設計一對探針,噹探針與待測模闆雜交後,通過連接反應將兩條探針5′與3′耑相連,連接產物作為PCR擴增模闆進行實時熒光定量檢測,從而對待測mRNA進行定量測定.以人ACTB基因為待測靶標,通過測定不同濃度的待測靶標及與待測靶標序列不同的RNA片段,分彆攷察方法的靈敏度與特異性,併檢測肺癌石蠟切片樣本中ACTB基因的錶達量,與傳統的反轉錄定量PCR檢測結果進行瞭對比.本方法的檢齣限為150 fmol/L,定量線性範圍為150 fmol/L～300 pmol/L,併且具有良好的特異性.在對石蠟包埋組織樣本中的基因錶達量檢測時,本方法擴增檢測CT值比反轉錄實時定量PCR小,錶明本方法更適閤對高度降解的mRNA樣本進行定量測定.
허다생물양본(여석사포매조직양본)중적mRNA역단렬위소편단,이용전통방법검측교곤난.위료측정고도강해적mRNA,본연구침대대측mRNA단편단설계일대탐침,당탐침여대측모판잡교후,통과련접반응장량조탐침5′여3′단상련,련접산물작위PCR확증모판진행실시형광정량검측,종이대대측mRNA진행정량측정.이인ACTB기인위대측파표,통과측정불동농도적대측파표급여대측파표서렬불동적RNA편단,분별고찰방법적령민도여특이성,병검측폐암석사절편양본중ACTB기인적표체량,여전통적반전록정량PCR검측결과진행료대비.본방법적검출한위150 fmol/L,정량선성범위위150 fmol/L～300 pmol/L,병차구유량호적특이성.재대석사포매조직양본중적기인표체량검측시,본방법확증검측CT치비반전록실시정량PCR소,표명본방법경괄합대고도강해적mRNA양본진행정량측정.
