国际检验医学杂志
國際檢驗醫學雜誌
국제검험의학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2013年
11期
1345-1347,1350
,共4页
蒋智文%陈维春%郑慧玲%周静%刘新光
蔣智文%陳維春%鄭慧玲%週靜%劉新光
장지문%진유춘%정혜령%주정%류신광
AHA1蛋白%A型核纤层蛋白%载体%免疫印迹
AHA1蛋白%A型覈纖層蛋白%載體%免疫印跡
AHA1단백%A형핵섬층단백%재체%면역인적
AHA1 protein%A-type lamin proteins%vector%Western blot
目的 构建AHA1与荧光蛋白GFP融合的真核表达载体,并在HEK293细胞中进行表达,然后检测AHA1重组蛋白在细胞中的表达,以及与A型核纤层蛋白在细胞中的共定位.方法 提取HEK293细胞中总RNA,随之逆转录成cDNA,然后设计引物扩增AHA1的编码序列后构建到pEGFP-N1载体中,转染HEK293细胞后,通过免疫印迹检测重组AHA1蛋白在细胞中的表达,采用激光共聚焦显微镜观察重组AHA1蛋白与A型核纤层蛋白在细胞中的共定位.结果 经PCR和DNA限制性内切酶鉴定,最后通过DNA测序并进行序列相似性分析比对,确定pEGFP-N1-AHA1重组质粒构建成功；在HEK293细胞中转染pEGFP-N1-AHA1重组质粒后,检测发现,重组AHA1蛋白在细胞中已经成功表达,并且部分AHA1蛋白与核纤层蛋白A共定位于细胞的核膜上,但是AHA1蛋白与核纤层蛋白C在细胞中不能共定位.结论 成功构建了AHA1与GFP荧光蛋白的重组质粒,并且AHA1蛋白与核纤层蛋白A在细胞中能够共定位,而不与核纤层蛋白C共定位.
目的 構建AHA1與熒光蛋白GFP融閤的真覈錶達載體,併在HEK293細胞中進行錶達,然後檢測AHA1重組蛋白在細胞中的錶達,以及與A型覈纖層蛋白在細胞中的共定位.方法 提取HEK293細胞中總RNA,隨之逆轉錄成cDNA,然後設計引物擴增AHA1的編碼序列後構建到pEGFP-N1載體中,轉染HEK293細胞後,通過免疫印跡檢測重組AHA1蛋白在細胞中的錶達,採用激光共聚焦顯微鏡觀察重組AHA1蛋白與A型覈纖層蛋白在細胞中的共定位.結果 經PCR和DNA限製性內切酶鑒定,最後通過DNA測序併進行序列相似性分析比對,確定pEGFP-N1-AHA1重組質粒構建成功；在HEK293細胞中轉染pEGFP-N1-AHA1重組質粒後,檢測髮現,重組AHA1蛋白在細胞中已經成功錶達,併且部分AHA1蛋白與覈纖層蛋白A共定位于細胞的覈膜上,但是AHA1蛋白與覈纖層蛋白C在細胞中不能共定位.結論 成功構建瞭AHA1與GFP熒光蛋白的重組質粒,併且AHA1蛋白與覈纖層蛋白A在細胞中能夠共定位,而不與覈纖層蛋白C共定位.
목적 구건AHA1여형광단백GFP융합적진핵표체재체,병재HEK293세포중진행표체,연후검측AHA1중조단백재세포중적표체,이급여A형핵섬층단백재세포중적공정위.방법 제취HEK293세포중총RNA,수지역전록성cDNA,연후설계인물확증AHA1적편마서렬후구건도pEGFP-N1재체중,전염HEK293세포후,통과면역인적검측중조AHA1단백재세포중적표체,채용격광공취초현미경관찰중조AHA1단백여A형핵섬층단백재세포중적공정위.결과 경PCR화DNA한제성내절매감정,최후통과DNA측서병진행서렬상사성분석비대,학정pEGFP-N1-AHA1중조질립구건성공；재HEK293세포중전염pEGFP-N1-AHA1중조질립후,검측발현,중조AHA1단백재세포중이경성공표체,병차부분AHA1단백여핵섬층단백A공정위우세포적핵막상,단시AHA1단백여핵섬층단백C재세포중불능공정위.결론 성공구건료AHA1여GFP형광단백적중조질립,병차AHA1단백여핵섬층단백A재세포중능구공정위,이불여핵섬층단백C공정위.
