中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
2013年
3期
281-285
,共5页
蔡炯%郑堃%党永红%李方
蔡炯%鄭堃%黨永紅%李方
채형%정곤%당영홍%리방
人类表皮生长因子受体2%亲和体%表达%纯化
人類錶皮生長因子受體2%親和體%錶達%純化
인류표피생장인자수체2%친화체%표체%순화
human epidermal growth factor receptor-2%affibody%expression%purification
目的 通过基因重组表达制备一种氨基端带有HEHEHE序列,羧基端带有GGGC序列的ZHER2∶V2亲和体,为无创的人类表皮生长因子受体2 (HER2)显像创造条件.方法 采用基因设计软件,将HER2亲和体编码基因的密码子进行优化,使之适合于大肠杆菌重组表达.在HER2亲和体的氨基端增加HEHEHE氨基酸序列,羧基端增加GGGC氨基酸序列.采用HindⅢ酶切鉴定合成基因长度,基因测序证实合成的基因序列.将HER2亲和体基因克隆入pET22b(+)质粒,转化感受态BL21 (DE3)大肠杆菌.IPTG诱导重组表达菌后用SDS-PAGE分析鉴定表达产物的相对分子质量.镍柱亲和结合、咪唑洗脱纯化蛋白质.同位素68Ga标记亲和体后通过饱和分析测定HER2阳性细胞MDAMB-361的亲和力.结果 HindⅢ酶切和基因测序证实,合成的HER2亲和体基因序列5’端含有HEHEHE的基因编码序列,3’端含有GGGC的基因编码序列.经过基因克隆、转化和IPTG诱导,发现重组大肠杆菌新表达相对分子质量约8×103的蛋白质.重组表达蛋白质经镍柱亲和结合后,经60 mmol/L咪唑洗脱得以纯化.亲和体经68Ga标记后和HER2阳性细胞MDA-MB-361的亲和力Kd值为1.5 nmol/L.结论 获得一种氨基端带有HEHEHE序列,羧基端带有GGGC序列的ZHER2∶V2亲和体.
目的 通過基因重組錶達製備一種氨基耑帶有HEHEHE序列,羧基耑帶有GGGC序列的ZHER2∶V2親和體,為無創的人類錶皮生長因子受體2 (HER2)顯像創造條件.方法 採用基因設計軟件,將HER2親和體編碼基因的密碼子進行優化,使之適閤于大腸桿菌重組錶達.在HER2親和體的氨基耑增加HEHEHE氨基痠序列,羧基耑增加GGGC氨基痠序列.採用HindⅢ酶切鑒定閤成基因長度,基因測序證實閤成的基因序列.將HER2親和體基因剋隆入pET22b(+)質粒,轉化感受態BL21 (DE3)大腸桿菌.IPTG誘導重組錶達菌後用SDS-PAGE分析鑒定錶達產物的相對分子質量.鎳柱親和結閤、咪唑洗脫純化蛋白質.同位素68Ga標記親和體後通過飽和分析測定HER2暘性細胞MDAMB-361的親和力.結果 HindⅢ酶切和基因測序證實,閤成的HER2親和體基因序列5’耑含有HEHEHE的基因編碼序列,3’耑含有GGGC的基因編碼序列.經過基因剋隆、轉化和IPTG誘導,髮現重組大腸桿菌新錶達相對分子質量約8×103的蛋白質.重組錶達蛋白質經鎳柱親和結閤後,經60 mmol/L咪唑洗脫得以純化.親和體經68Ga標記後和HER2暘性細胞MDA-MB-361的親和力Kd值為1.5 nmol/L.結論 穫得一種氨基耑帶有HEHEHE序列,羧基耑帶有GGGC序列的ZHER2∶V2親和體.
목적 통과기인중조표체제비일충안기단대유HEHEHE서렬,최기단대유GGGC서렬적ZHER2∶V2친화체,위무창적인류표피생장인자수체2 (HER2)현상창조조건.방법 채용기인설계연건,장HER2친화체편마기인적밀마자진행우화,사지괄합우대장간균중조표체.재HER2친화체적안기단증가HEHEHE안기산서렬,최기단증가GGGC안기산서렬.채용HindⅢ매절감정합성기인장도,기인측서증실합성적기인서렬.장HER2친화체기인극륭입pET22b(+)질립,전화감수태BL21 (DE3)대장간균.IPTG유도중조표체균후용SDS-PAGE분석감정표체산물적상대분자질량.얼주친화결합、미서세탈순화단백질.동위소68Ga표기친화체후통과포화분석측정HER2양성세포MDAMB-361적친화력.결과 HindⅢ매절화기인측서증실,합성적HER2친화체기인서렬5’단함유HEHEHE적기인편마서렬,3’단함유GGGC적기인편마서렬.경과기인극륭、전화화IPTG유도,발현중조대장간균신표체상대분자질량약8×103적단백질.중조표체단백질경얼주친화결합후,경60 mmol/L미서세탈득이순화.친화체경68Ga표기후화HER2양성세포MDA-MB-361적친화력Kd치위1.5 nmol/L.결론 획득일충안기단대유HEHEHE서렬,최기단대유GGGC서렬적ZHER2∶V2친화체.
