中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
2013年
3期
243-248
,共6页
精原干细胞%分离%培养%肿瘤干细胞%CD44
精原榦細胞%分離%培養%腫瘤榦細胞%CD44
정원간세포%분리%배양%종류간세포%CD44
spermatogonial stem cells%isolation%culture%cancer stem cells%CD44
目的 建立一套简单高效的小鼠精原干细胞(SSCs)分离及体外培养体系,检测相关干细胞标记物的表达,为将SSCs用于抗肿瘤干细胞药物的筛选及鉴定奠定基础.方法 采用组织化学法比较DBA/2乳鼠(6～8天龄)和成年鼠(26～28周龄)曲细精管解剖结构的特点.选取乳鼠睾丸制备原代细胞,比较不同消化酶的消化效率.利用差异贴壁法即睾丸体细胞在明胶上贴壁而精原细胞不贴壁的特点,富集SSCs.比较以StemPro34和α-MEM为基础培养基的培养体系及明胶、血清等因素对细胞贴壁及生长性能的影响,观察不同培养时间的细胞形态,免疫荧光法鉴定SSCs及肿瘤干细胞(CSCs)相关标记物的表达.结果 乳鼠睾丸中精原细胞含量相对较高,胰蛋白酶消化后能获得较多数量的原代细胞.在以StemPro34为基础培养基,含1％胎牛血清及明胶铺板的条件下体细胞贴壁较充分.分离的精原细胞在以丝裂霉素C处理过的体细胞为饲养层的环境中生长良好,呈现出典型的SSCs生长特性,13 d左右可形成明显的细胞球.免疫荧光结果显示,SSCs标记物胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)家族受体α1 (GFRα1)及VASA蛋白在细胞球中高表达；CSCs标记物CD44在As、Apr、Aal各期细胞及细胞球的内部细胞中均有表达,而体细胞中则几乎不表达.结论 初步建立了DBA/2小鼠SSCs的分离及体外培养体系,CD44在发育早期的精原细胞中表达较强.
目的 建立一套簡單高效的小鼠精原榦細胞(SSCs)分離及體外培養體繫,檢測相關榦細胞標記物的錶達,為將SSCs用于抗腫瘤榦細胞藥物的篩選及鑒定奠定基礎.方法 採用組織化學法比較DBA/2乳鼠(6～8天齡)和成年鼠(26～28週齡)麯細精管解剖結構的特點.選取乳鼠睪汍製備原代細胞,比較不同消化酶的消化效率.利用差異貼壁法即睪汍體細胞在明膠上貼壁而精原細胞不貼壁的特點,富集SSCs.比較以StemPro34和α-MEM為基礎培養基的培養體繫及明膠、血清等因素對細胞貼壁及生長性能的影響,觀察不同培養時間的細胞形態,免疫熒光法鑒定SSCs及腫瘤榦細胞(CSCs)相關標記物的錶達.結果 乳鼠睪汍中精原細胞含量相對較高,胰蛋白酶消化後能穫得較多數量的原代細胞.在以StemPro34為基礎培養基,含1％胎牛血清及明膠鋪闆的條件下體細胞貼壁較充分.分離的精原細胞在以絲裂黴素C處理過的體細胞為飼養層的環境中生長良好,呈現齣典型的SSCs生長特性,13 d左右可形成明顯的細胞毬.免疫熒光結果顯示,SSCs標記物膠質細胞源性神經營養因子(GDNF)傢族受體α1 (GFRα1)及VASA蛋白在細胞毬中高錶達；CSCs標記物CD44在As、Apr、Aal各期細胞及細胞毬的內部細胞中均有錶達,而體細胞中則幾乎不錶達.結論 初步建立瞭DBA/2小鼠SSCs的分離及體外培養體繫,CD44在髮育早期的精原細胞中錶達較彊.
목적 건립일투간단고효적소서정원간세포(SSCs)분리급체외배양체계,검측상관간세포표기물적표체,위장SSCs용우항종류간세포약물적사선급감정전정기출.방법 채용조직화학법비교DBA/2유서(6～8천령)화성년서(26～28주령)곡세정관해부결구적특점.선취유서고환제비원대세포,비교불동소화매적소화효솔.이용차이첩벽법즉고환체세포재명효상첩벽이정원세포불첩벽적특점,부집SSCs.비교이StemPro34화α-MEM위기출배양기적배양체계급명효、혈청등인소대세포첩벽급생장성능적영향,관찰불동배양시간적세포형태,면역형광법감정SSCs급종류간세포(CSCs)상관표기물적표체.결과 유서고환중정원세포함량상대교고,이단백매소화후능획득교다수량적원대세포.재이StemPro34위기출배양기,함1％태우혈청급명효포판적조건하체세포첩벽교충분.분리적정원세포재이사렬매소C처리과적체세포위사양층적배경중생장량호,정현출전형적SSCs생장특성,13 d좌우가형성명현적세포구.면역형광결과현시,SSCs표기물효질세포원성신경영양인자(GDNF)가족수체α1 (GFRα1)급VASA단백재세포구중고표체；CSCs표기물CD44재As、Apr、Aal각기세포급세포구적내부세포중균유표체,이체세포중칙궤호불표체.결론 초보건립료DBA/2소서SSCs적분리급체외배양체계,CD44재발육조기적정원세포중표체교강.
