CAJ | 학술논문

目的:在以往发现家族性先天性房间隔缺损GATA-4 M310V单基因突变的基础上,本研究进一步探讨该突变导致家族性房间隔缺损的可能机制.方法:选取一个先天性房间隔缺损家族(三级亲属成员共31人中有8例单纯性房间隔缺损患者),采集外周血样,采集少量心肌组织标本.体外成功构建GATA-4基因野生型及突变型真核表达载体并转染细胞系,按照不同载体组合(16种组合)转染Hela细胞,应用双荧光素酶报告系统检测GATA-4基因突变对心脏肌球蛋白重链-α(α-Myhc)、心房利钠肽因子(ANF)启动子活性的影响.应用绿色荧光蛋白定位法检测GATA-4 M310V突变对GATA4蛋白核定位的影响.结果:双荧光素酶检测结果:对于α-Myhc启动子,引入GATA-4基因表达载体后,随着GATA-4表达载体浓度的上升,其启动子活性呈现上升趋势,差异有统计学意义(P＜0.005)；引入GATA-4(A928G)突变基因表达载体后,相同GATA-4表达载体转染剂量(100 ng、200 ng)调控的启动子活性增强,差异有统计学意义(P＜0.005)；但随GATA-4突变型表达载体引入量的增加(300 ng),启动子活性似乎有下降趋势,差异无统计学意义(P=0.195).对于ANF启动子,引入GATA-4基因表达载体、GATA-4突变基因表达载体后,启动子活性变化组间差异及趋势变化并不明显(P＞0.05).结论:GATA-4 M310V突变影响了α-Myhc启动子活性及GATA4蛋白的核定位,该突变对GATA4蛋白核定位的影响可能是该突变导致家族性房间隔缺损新的重要分子生物学机制.
목적:재이왕발현가족성선천성방간격결손GATA-4 M310V단기인돌변적기출상,본연구진일보탐토해돌변도치가족성방간격결손적가능궤제.방법:선취일개선천성방간격결손가족(삼급친속성원공31인중유8례단순성방간격결손환자),채집외주혈양,채집소량심기조직표본.체외성공구건GATA-4기인야생형급돌변형진핵표체재체병전염세포계,안조불동재체조합(16충조합)전염Hela세포,응용쌍형광소매보고계통검측GATA-4기인돌변대심장기구단백중련-α(α-Myhc)、심방리납태인자(ANF)계동자활성적영향.응용록색형광단백정위법검측GATA-4 M310V돌변대GATA4단백핵정위적영향.결과:쌍형광소매검측결과:대우α-Myhc계동자,인입GATA-4기인표체재체후,수착GATA-4표체재체농도적상승,기계동자활성정현상승추세,차이유통계학의의(P＜0.005)；인입GATA-4(A928G)돌변기인표체재체후,상동GATA-4표체재체전염제량(100 ng、200 ng)조공적계동자활성증강,차이유통계학의의(P＜0.005)；단수GATA-4돌변형표체재체인입량적증가(300 ng),계동자활성사호유하강추세,차이무통계학의의(P=0.195).대우ANF계동자,인입GATA-4기인표체재체、GATA-4돌변기인표체재체후,계동자활성변화조간차이급추세변화병불명현(P＞0.05).결론:GATA-4 M310V돌변영향료α-Myhc계동자활성급GATA4단백적핵정위,해돌변대GATA4단백핵정위적영향가능시해돌변도치가족성방간격결손신적중요분자생물학궤제.