东南国防医药
東南國防醫藥
동남국방의약
JOURNAL OF SOUTHEAST CHINA NATIONAL DEFENCE MEDICAL SCIENCE
2013年
4期
321-324
,共4页
吕恒%张锦海%顾海涛%王平%王长军%王玉邦
呂恆%張錦海%顧海濤%王平%王長軍%王玉邦
려항%장금해%고해도%왕평%왕장군%왕옥방
肠出血性大肠杆菌O157∶H7%可视化检测%环介导等温扩增%羟基萘酚蓝
腸齣血性大腸桿菌O157∶H7%可視化檢測%環介導等溫擴增%羥基萘酚藍
장출혈성대장간균O157∶H7%가시화검측%배개도등온확증%간기내분람
enterohemorrhagic Escherichia coli O157∶H7%visual detection%loop-mediated isothermal amplification (LAMP)%hydroxynaphthol blue (HNB)
目的 应用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术和羟基萘酚蓝(Hydroxynaphtholblue,HNB)指示剂建立肠出血性大肠杆菌(EHEC) O157∶H7快速可视化检测方法.方法 针对EHEC O157∶H7脂多糖编码基因rfbE保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入染料HNB作为LAMP扩增的指示剂,结合LAMP浊度仪优化扩增条件,根据HNB的颜色变化进行结果判定,并评价检测方法的特异性和灵敏度.结果 本方法最低检出限约为100拷贝/反应管,高于普通PCR;检测特异性高,仅EHEC O157∶H7反应管HNB颜色由紫罗兰变成天蓝色,而肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠聚集性大肠杆菌(EAEC)、宋内志贺菌、福氏志贺菌均不发生变色反应；体系的扩增效率高于普通PCR,40 min内出结果.结论 建立的基于颜色判定的EHEC O157∶H7 LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于EHEC O157∶H7现场快速检测.
目的 應用環介導等溫擴增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技術和羥基萘酚藍(Hydroxynaphtholblue,HNB)指示劑建立腸齣血性大腸桿菌(EHEC) O157∶H7快速可視化檢測方法.方法 針對EHEC O157∶H7脂多糖編碼基因rfbE保守區設計LAMP引物及環引物,反應體繫加入染料HNB作為LAMP擴增的指示劑,結閤LAMP濁度儀優化擴增條件,根據HNB的顏色變化進行結果判定,併評價檢測方法的特異性和靈敏度.結果 本方法最低檢齣限約為100拷貝/反應管,高于普通PCR;檢測特異性高,僅EHEC O157∶H7反應管HNB顏色由紫囉蘭變成天藍色,而腸產毒性大腸桿菌(ETEC)、腸緻病性大腸桿菌(EPEC)、腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)、腸聚集性大腸桿菌(EAEC)、宋內誌賀菌、福氏誌賀菌均不髮生變色反應；體繫的擴增效率高于普通PCR,40 min內齣結果.結論 建立的基于顏色判定的EHEC O157∶H7 LAMP檢測方法具有特異、靈敏、設備要求簡單等特點,適用于EHEC O157∶H7現場快速檢測.
목적 응용배개도등온확증(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)기술화간기내분람(Hydroxynaphtholblue,HNB)지시제건립장출혈성대장간균(EHEC) O157∶H7쾌속가시화검측방법.방법 침대EHEC O157∶H7지다당편마기인rfbE보수구설계LAMP인물급배인물,반응체계가입염료HNB작위LAMP확증적지시제,결합LAMP탁도의우화확증조건,근거HNB적안색변화진행결과판정,병평개검측방법적특이성화령민도.결과 본방법최저검출한약위100고패/반응관,고우보통PCR;검측특이성고,부EHEC O157∶H7반응관HNB안색유자라란변성천람색,이장산독성대장간균(ETEC)、장치병성대장간균(EPEC)、장침습성대장간균(EIEC)、장취집성대장간균(EAEC)、송내지하균、복씨지하균균불발생변색반응；체계적확증효솔고우보통PCR,40 min내출결과.결론 건립적기우안색판정적EHEC O157∶H7 LAMP검측방법구유특이、령민、설비요구간단등특점,괄용우EHEC O157∶H7현장쾌속검측.
