山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2013年
11期
25-28
,共4页
崔文静%张矫%马祥敏%王雯雯%王欣
崔文靜%張矯%馬祥敏%王雯雯%王訢
최문정%장교%마상민%왕문문%왕흔
双启动子%RNA干扰%协同效应
雙啟動子%RNA榦擾%協同效應
쌍계동자%RNA간우%협동효응
目的 构建含有两段不同靶特异干扰序列的双启动子shRNA载体,并比较其与单个靶特异干扰序列的shRNA载体的干扰效应.方法 通过PCR方法扩增H1启动子序列,构建含有U6和H1双启动子的shRNA载体,命名为PLKO.1-H1.设计2对针对EGFP基因不同位点的shRNA片段,同时设计2对无干扰作用的片段shS1和shS2作为对照.分别构建携带上述片段的慢病毒表达载体shEGFP1-H1-shS2、shS1-H1-shEGFP2及shEGFP1-H1-shEGFP2,同时以shS1-H1-shS2质粒作为对照.将重组质粒转染293t细胞,收集病毒感染Hela/EGFP细胞.比较各组之间细胞的荧光强度,并以Western blot检测EGFP的蛋白表达情况.结果 成功构建含有双启动子的shRNA慢病毒表达载体.实验组与对照组相比,EGFP蛋白表达水平明显下调,以shEGFP1-H1-shEGFP2重组质粒干扰效应最强.结论 含有两段不同靶特异干扰序列的双启动子shRNA载体存在协同干扰效应.
目的 構建含有兩段不同靶特異榦擾序列的雙啟動子shRNA載體,併比較其與單箇靶特異榦擾序列的shRNA載體的榦擾效應.方法 通過PCR方法擴增H1啟動子序列,構建含有U6和H1雙啟動子的shRNA載體,命名為PLKO.1-H1.設計2對針對EGFP基因不同位點的shRNA片段,同時設計2對無榦擾作用的片段shS1和shS2作為對照.分彆構建攜帶上述片段的慢病毒錶達載體shEGFP1-H1-shS2、shS1-H1-shEGFP2及shEGFP1-H1-shEGFP2,同時以shS1-H1-shS2質粒作為對照.將重組質粒轉染293t細胞,收集病毒感染Hela/EGFP細胞.比較各組之間細胞的熒光彊度,併以Western blot檢測EGFP的蛋白錶達情況.結果 成功構建含有雙啟動子的shRNA慢病毒錶達載體.實驗組與對照組相比,EGFP蛋白錶達水平明顯下調,以shEGFP1-H1-shEGFP2重組質粒榦擾效應最彊.結論 含有兩段不同靶特異榦擾序列的雙啟動子shRNA載體存在協同榦擾效應.
목적 구건함유량단불동파특이간우서렬적쌍계동자shRNA재체,병비교기여단개파특이간우서렬적shRNA재체적간우효응.방법 통과PCR방법확증H1계동자서렬,구건함유U6화H1쌍계동자적shRNA재체,명명위PLKO.1-H1.설계2대침대EGFP기인불동위점적shRNA편단,동시설계2대무간우작용적편단shS1화shS2작위대조.분별구건휴대상술편단적만병독표체재체shEGFP1-H1-shS2、shS1-H1-shEGFP2급shEGFP1-H1-shEGFP2,동시이shS1-H1-shS2질립작위대조.장중조질립전염293t세포,수집병독감염Hela/EGFP세포.비교각조지간세포적형광강도,병이Western blot검측EGFP적단백표체정황.결과 성공구건함유쌍계동자적shRNA만병독표체재체.실험조여대조조상비,EGFP단백표체수평명현하조,이shEGFP1-H1-shEGFP2중조질립간우효응최강.결론 함유량단불동파특이간우서렬적쌍계동자shRNA재체존재협동간우효응.
