新疆农业科学
新疆農業科學
신강농업과학
XINJIANG AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
6期
1058-1063
,共6页
李玲%杨瑞瑞%易小娅%曾幼玲
李玲%楊瑞瑞%易小婭%曾幼玲
리령%양서서%역소아%증유령
盐穗木%WD-repeat蛋白基因%绿色荧光蛋白(GFP)%载体构建%亚细胞定位
鹽穗木%WD-repeat蛋白基因%綠色熒光蛋白(GFP)%載體構建%亞細胞定位
염수목%WD-repeat단백기인%록색형광단백(GFP)%재체구건%아세포정위
Halostachys caspica%WD-repeat protein gene%green fluorescent protein%vector construction%subcellular localization
[目的]WD-repeat蛋白是一类结构高度保守的蛋白质家族,常分布于细胞质或细胞核内,具信号转导、染色体组装,转录调控等多种功能.实验对极端耐盐的藜科真盐生植物盐穗木的WD-40蛋白进行亚细胞定位,初步探讨该基因参与盐穗木耐盐抗旱的机制.采用绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因,对真盐生植物盐穗木HcWD-40基因的表达产物进行亚细胞水平定位.[方法]PCR扩增获得序列正确的HcWD-40,构建pCAMBIA 1301-1-HcWD-40-mGFP融合基因表达载体,采用伯乐(Bio-RAD)基因枪介导的方法转化到洋葱表皮细胞中,28℃暗培养16～24 h后,以仅表达GFP的洋葱细胞作为对照,利用激光共聚焦显微镜观察GFP在洋葱表皮细胞中的分布.[结果]重组载体pCAMBIA 1301-1-HcWD-40-mGFP可成功转入洋葱表皮细胞且HcWD-40蛋白正确表达.激光共聚焦显微镜检测结果表明该基因表达产物分布于细胞质与细胞核中.[结论]目的蛋白HcWD-40定位于细胞质和细胞核内,可能间接或直接参与多种细胞过程的调控.
[目的]WD-repeat蛋白是一類結構高度保守的蛋白質傢族,常分佈于細胞質或細胞覈內,具信號轉導、染色體組裝,轉錄調控等多種功能.實驗對極耑耐鹽的藜科真鹽生植物鹽穗木的WD-40蛋白進行亞細胞定位,初步探討該基因參與鹽穗木耐鹽抗旱的機製.採用綠色熒光蛋白(GFP)基因為報告基因,對真鹽生植物鹽穗木HcWD-40基因的錶達產物進行亞細胞水平定位.[方法]PCR擴增穫得序列正確的HcWD-40,構建pCAMBIA 1301-1-HcWD-40-mGFP融閤基因錶達載體,採用伯樂(Bio-RAD)基因鎗介導的方法轉化到洋蔥錶皮細胞中,28℃暗培養16～24 h後,以僅錶達GFP的洋蔥細胞作為對照,利用激光共聚焦顯微鏡觀察GFP在洋蔥錶皮細胞中的分佈.[結果]重組載體pCAMBIA 1301-1-HcWD-40-mGFP可成功轉入洋蔥錶皮細胞且HcWD-40蛋白正確錶達.激光共聚焦顯微鏡檢測結果錶明該基因錶達產物分佈于細胞質與細胞覈中.[結論]目的蛋白HcWD-40定位于細胞質和細胞覈內,可能間接或直接參與多種細胞過程的調控.
[목적]WD-repeat단백시일류결구고도보수적단백질가족,상분포우세포질혹세포핵내,구신호전도、염색체조장,전록조공등다충공능.실험대겁단내염적려과진염생식물염수목적WD-40단백진행아세포정위,초보탐토해기인삼여염수목내염항한적궤제.채용록색형광단백(GFP)기인위보고기인,대진염생식물염수목HcWD-40기인적표체산물진행아세포수평정위.[방법]PCR확증획득서렬정학적HcWD-40,구건pCAMBIA 1301-1-HcWD-40-mGFP융합기인표체재체,채용백악(Bio-RAD)기인창개도적방법전화도양총표피세포중,28℃암배양16～24 h후,이부표체GFP적양총세포작위대조,이용격광공취초현미경관찰GFP재양총표피세포중적분포.[결과]중조재체pCAMBIA 1301-1-HcWD-40-mGFP가성공전입양총표피세포차HcWD-40단백정학표체.격광공취초현미경검측결과표명해기인표체산물분포우세포질여세포핵중.[결론]목적단백HcWD-40정위우세포질화세포핵내,가능간접혹직접삼여다충세포과정적조공.
