亚热带农业研究
亞熱帶農業研究
아열대농업연구
SUBTROPICAL AGRICULTURE RESEARCH
2013年
3期
207-211
,共5页
王婷%何炜%何文锦%叶冰莹%陈由强
王婷%何煒%何文錦%葉冰瑩%陳由彊
왕정%하위%하문금%협빙형%진유강
表达载体构建%果糖-6-磷酸,2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酯酶(F2KP)%定点突变
錶達載體構建%果糖-6-燐痠,2-激酶/果糖-2,6-二燐痠酯酶(F2KP)%定點突變
표체재체구건%과당-6-린산,2-격매/과당-2,6-이린산지매(F2KP)%정점돌변
果糖-6-磷酸,2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酯酶(fructose-6-phosphate,2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase,F2KP)是影响生物碳积累和分配的调控关键酶,同时也是一个具有激酶和酯酶两种催化活性的双功能酶.为筛选出高醋酶酶活性的改造酶分子,本研究通过定点突变与片段缺失方法改造蔗叶F2KP基因,将蔗叶F2KP基因的Asp442、His508和Arg446分别突变为Gly、Ala和Pro,并且将分别缺失F2KP基因的酯酶的大部分和激酶的大部分构建F2KP激酶重组片段和酯酶重组片段,将突变后的基因与表达载体pPIC9K双酶切后进行连接,构建重组质粒.经过菌落PCR和双酶切重组质粒均证明已将目的片段转到酵母表达载体pPIC9K内.
果糖-6-燐痠,2-激酶/果糖-2,6-二燐痠酯酶(fructose-6-phosphate,2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase,F2KP)是影響生物碳積纍和分配的調控關鍵酶,同時也是一箇具有激酶和酯酶兩種催化活性的雙功能酶.為篩選齣高醋酶酶活性的改造酶分子,本研究通過定點突變與片段缺失方法改造蔗葉F2KP基因,將蔗葉F2KP基因的Asp442、His508和Arg446分彆突變為Gly、Ala和Pro,併且將分彆缺失F2KP基因的酯酶的大部分和激酶的大部分構建F2KP激酶重組片段和酯酶重組片段,將突變後的基因與錶達載體pPIC9K雙酶切後進行連接,構建重組質粒.經過菌落PCR和雙酶切重組質粒均證明已將目的片段轉到酵母錶達載體pPIC9K內.
과당-6-린산,2-격매/과당-2,6-이린산지매(fructose-6-phosphate,2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase,F2KP)시영향생물탄적루화분배적조공관건매,동시야시일개구유격매화지매량충최화활성적쌍공능매.위사선출고작매매활성적개조매분자,본연구통과정점돌변여편단결실방법개조자협F2KP기인,장자협F2KP기인적Asp442、His508화Arg446분별돌변위Gly、Ala화Pro,병차장분별결실F2KP기인적지매적대부분화격매적대부분구건F2KP격매중조편단화지매중조편단,장돌변후적기인여표체재체pPIC9K쌍매절후진행련접,구건중조질립.경과균락PCR화쌍매절중조질립균증명이장목적편단전도효모표체재체pPIC9K내.
