中国现代神经疾病杂志
中國現代神經疾病雜誌
중국현대신경질병잡지
CHINESE JOURNAL OF CONTEMPORARY NEUROLOGY AND NEUROSURGERY
2013年
7期
587-595
,共9页
刘振华%唐北沙%严新翔%郭纪锋
劉振華%唐北沙%嚴新翔%郭紀鋒
류진화%당북사%엄신상%곽기봉
帕金森病%基因表达谱%突变%转染%免疫印迹法%DNA探针%细胞,培养的
帕金森病%基因錶達譜%突變%轉染%免疫印跡法%DNA探針%細胞,培養的
파금삼병%기인표체보%돌변%전염%면역인적법%DNA탐침%세포,배양적
Parkinson disease%Gene expression profiling%Mutation%Transfection%Immunoblotting%DNA probes%Cells,cultured
研究背景 DJ-1基因是常染色体隐性遗传性早发性帕金森综合征(AREP)的致病基因之一,其作用机制尚不十分清楚.既往研究提示,DJ-1蛋白可以通过其转录调控活性调控某些基因的表达,从而在帕金森病的发病机制中发挥作用.本研究小组发现一种新的D J-1基因突变位点—L10P,即DJ-1基因编码框第29位碱基胸腺嘧啶(T)→胞嘧啶(C),从而使DJ-1蛋白第10位上的亮氨酸被脯氨酸替代.探讨DJ-1基因L10P突变在帕金森病发病机制中的作用,可以明确其通过转录调控活性调控相关基因表达的具体方式,继而参与帕金森病之发病机制.方法 筛选稳定表达pCMV-Tag2A-Flag、pCMV-Tag2A-Flag-DJ-1和pCMV-Tag2A-Flag-DJ-1-L10P的人胚肾细胞293(HEK293)单克隆细胞株,通过DNA、RNA和蛋白质水平鉴定,以证实获得的HEK293单克隆细胞株是否能够稳定表达空载体、野生型DJ-1蛋白和L10P突变型DJ-1蛋白,基因芯片检测技术对各组HEK293单克隆细胞株进行差异基因筛选.结果 基因芯片技术检测显示,与空载体组相比,野生型组共有14个基因表达上调、28个基因表达下调,L10P突变型组有14个基因表达上调、9个基因表达下调；与野生型组相比,L10P突变型组共有59个基因表达上调、27个基因表达下调.这些差异基因分别参与信号转导、基因转录调控、细胞周期调节、细胞凋亡、氧化应激等生物学过程.结论 L10P突变型DJ-1蛋白可能通过直接或间接方式对差异基因进行表达调控,从而影响这些信号转导通路的正常功能,进而参与帕金森病的发病机制.
研究揹景 DJ-1基因是常染色體隱性遺傳性早髮性帕金森綜閤徵(AREP)的緻病基因之一,其作用機製尚不十分清楚.既往研究提示,DJ-1蛋白可以通過其轉錄調控活性調控某些基因的錶達,從而在帕金森病的髮病機製中髮揮作用.本研究小組髮現一種新的D J-1基因突變位點—L10P,即DJ-1基因編碼框第29位堿基胸腺嘧啶(T)→胞嘧啶(C),從而使DJ-1蛋白第10位上的亮氨痠被脯氨痠替代.探討DJ-1基因L10P突變在帕金森病髮病機製中的作用,可以明確其通過轉錄調控活性調控相關基因錶達的具體方式,繼而參與帕金森病之髮病機製.方法 篩選穩定錶達pCMV-Tag2A-Flag、pCMV-Tag2A-Flag-DJ-1和pCMV-Tag2A-Flag-DJ-1-L10P的人胚腎細胞293(HEK293)單剋隆細胞株,通過DNA、RNA和蛋白質水平鑒定,以證實穫得的HEK293單剋隆細胞株是否能夠穩定錶達空載體、野生型DJ-1蛋白和L10P突變型DJ-1蛋白,基因芯片檢測技術對各組HEK293單剋隆細胞株進行差異基因篩選.結果 基因芯片技術檢測顯示,與空載體組相比,野生型組共有14箇基因錶達上調、28箇基因錶達下調,L10P突變型組有14箇基因錶達上調、9箇基因錶達下調；與野生型組相比,L10P突變型組共有59箇基因錶達上調、27箇基因錶達下調.這些差異基因分彆參與信號轉導、基因轉錄調控、細胞週期調節、細胞凋亡、氧化應激等生物學過程.結論 L10P突變型DJ-1蛋白可能通過直接或間接方式對差異基因進行錶達調控,從而影響這些信號轉導通路的正常功能,進而參與帕金森病的髮病機製.
연구배경 DJ-1기인시상염색체은성유전성조발성파금삼종합정(AREP)적치병기인지일,기작용궤제상불십분청초.기왕연구제시,DJ-1단백가이통과기전록조공활성조공모사기인적표체,종이재파금삼병적발병궤제중발휘작용.본연구소조발현일충신적D J-1기인돌변위점—L10P,즉DJ-1기인편마광제29위감기흉선밀정(T)→포밀정(C),종이사DJ-1단백제10위상적량안산피포안산체대.탐토DJ-1기인L10P돌변재파금삼병발병궤제중적작용,가이명학기통과전록조공활성조공상관기인표체적구체방식,계이삼여파금삼병지발병궤제.방법 사선은정표체pCMV-Tag2A-Flag、pCMV-Tag2A-Flag-DJ-1화pCMV-Tag2A-Flag-DJ-1-L10P적인배신세포293(HEK293)단극륭세포주,통과DNA、RNA화단백질수평감정,이증실획득적HEK293단극륭세포주시부능구은정표체공재체、야생형DJ-1단백화L10P돌변형DJ-1단백,기인심편검측기술대각조HEK293단극륭세포주진행차이기인사선.결과 기인심편기술검측현시,여공재체조상비,야생형조공유14개기인표체상조、28개기인표체하조,L10P돌변형조유14개기인표체상조、9개기인표체하조；여야생형조상비,L10P돌변형조공유59개기인표체상조、27개기인표체하조.저사차이기인분별삼여신호전도、기인전록조공、세포주기조절、세포조망、양화응격등생물학과정.결론 L10P돌변형DJ-1단백가능통과직접혹간접방식대차이기인진행표체조공,종이영향저사신호전도통로적정상공능,진이삼여파금삼병적발병궤제.
