军事医学
軍事醫學
군사의학
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2013年
7期
498-501
,共4页
刘磊%张义全%倪斌%王丽%杨瑞馥%周冬生
劉磊%張義全%倪斌%王麗%楊瑞馥%週鼕生
류뢰%장의전%예빈%왕려%양서복%주동생
鼠疫耶尔森菌%转录调控%Fur%waaA
鼠疫耶爾森菌%轉錄調控%Fur%waaA
서역야이삼균%전록조공%Fur%waaA
目的 从转录水平上研究鼠疫耶尔森菌Fur蛋白对waaA的转录调控机制.方法 提取鼠疫菌野生株(WT)和fur突变株(Δfur)的总RNA,采用引物延伸实验研究waaA的转录起始位点,并根据产物的丰度判断Fur蛋白对waaA的调控关系.构建克隆有waaA上游启动子区的LacZ重组质粒,将重组质粒转入WT和Δfur中,通过测定β-半乳糖苷酶活性来比较两株重组菌中的waaA启动子活性,进一步验证Fur蛋白对waaA的调控关系.PCR扩增waaA启动子区DNA序列全长,并纯化鼠疫菌His-Fur蛋白,通过体外的凝胶阻滞实验,即电泳迁移率变动实验(EMSA)和DNaseⅠ足迹实验验证His-Fur蛋白对waaA启动子区是否具有直接的结合作用.结果 与结论DNaseⅠ足迹实验表明,Fur蛋白对waaA启动子区的结合位置为-204至-150之间的碱基(翻译起始位点为+1);引物延伸实验显示waaA有一个转录起始位点T(-26),且该位点的转录活性直接被Fur蛋白激活.
目的 從轉錄水平上研究鼠疫耶爾森菌Fur蛋白對waaA的轉錄調控機製.方法 提取鼠疫菌野生株(WT)和fur突變株(Δfur)的總RNA,採用引物延伸實驗研究waaA的轉錄起始位點,併根據產物的豐度判斷Fur蛋白對waaA的調控關繫.構建剋隆有waaA上遊啟動子區的LacZ重組質粒,將重組質粒轉入WT和Δfur中,通過測定β-半乳糖苷酶活性來比較兩株重組菌中的waaA啟動子活性,進一步驗證Fur蛋白對waaA的調控關繫.PCR擴增waaA啟動子區DNA序列全長,併純化鼠疫菌His-Fur蛋白,通過體外的凝膠阻滯實驗,即電泳遷移率變動實驗(EMSA)和DNaseⅠ足跡實驗驗證His-Fur蛋白對waaA啟動子區是否具有直接的結閤作用.結果 與結論DNaseⅠ足跡實驗錶明,Fur蛋白對waaA啟動子區的結閤位置為-204至-150之間的堿基(翻譯起始位點為+1);引物延伸實驗顯示waaA有一箇轉錄起始位點T(-26),且該位點的轉錄活性直接被Fur蛋白激活.
목적 종전록수평상연구서역야이삼균Fur단백대waaA적전록조공궤제.방법 제취서역균야생주(WT)화fur돌변주(Δfur)적총RNA,채용인물연신실험연구waaA적전록기시위점,병근거산물적봉도판단Fur단백대waaA적조공관계.구건극륭유waaA상유계동자구적LacZ중조질립,장중조질립전입WT화Δfur중,통과측정β-반유당감매활성래비교량주중조균중적waaA계동자활성,진일보험증Fur단백대waaA적조공관계.PCR확증waaA계동자구DNA서렬전장,병순화서역균His-Fur단백,통과체외적응효조체실험,즉전영천이솔변동실험(EMSA)화DNaseⅠ족적실험험증His-Fur단백대waaA계동자구시부구유직접적결합작용.결과 여결론DNaseⅠ족적실험표명,Fur단백대waaA계동자구적결합위치위-204지-150지간적감기(번역기시위점위+1);인물연신실험현시waaA유일개전록기시위점T(-26),차해위점적전록활성직접피Fur단백격활.
