医学研究生学报
醫學研究生學報
의학연구생학보
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
2013年
8期
789-793
,共5页
唐昭亮%胡水旺%樊启黄%姜枫%姜勇
唐昭亮%鬍水旺%樊啟黃%薑楓%薑勇
당소량%호수왕%번계황%강풍%강용
细胞角蛋白%分子克隆%氧化应激%信号通路
細胞角蛋白%分子剋隆%氧化應激%信號通路
세포각단백%분자극륭%양화응격%신호통로
目的 细胞角蛋白7(Cytokeratin-7,Krt7)与肿瘤发展以及炎症反应密切相关,氧化应激在此过程中扮演着重要的角色,文中旨在通过构建小鼠Krt7的真核表达载体,并观察其在NIH 3T3细胞中的表达、定位以及在氧化应激反应下的变化情况.方法 提取C57/BL6小鼠肺组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到Krt7编码序列,构建重组质粒pcDNA3-Krt7-HA.经脂质体转染NIH 3T3细胞,采用Western blot检测Krt7表达,免疫荧光检测其在细胞中的表达、定位以及在过氧化氢(H2O2)刺激下的变化情况.结果 重组质粒构建成功.Western blot显示该质粒能够在NIH 3T3细胞中有效表达,免疫荧光检测表达产物主要分布在细胞质中,随着H2O2刺激时间的增加细胞内颗粒状蛋白聚集物的形成愈发明显且在60min处发生入核现象.MEK通路抑制剂PD98059可明显抑制这一过程.结论 成功构建了带HA标签的Krt7真核表达载体,该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位,H2O2诱导Krt7在NIH 3T3细胞内的形态及定位变化依赖于MEK介导的信号通路.
目的 細胞角蛋白7(Cytokeratin-7,Krt7)與腫瘤髮展以及炎癥反應密切相關,氧化應激在此過程中扮縯著重要的角色,文中旨在通過構建小鼠Krt7的真覈錶達載體,併觀察其在NIH 3T3細胞中的錶達、定位以及在氧化應激反應下的變化情況.方法 提取C57/BL6小鼠肺組織的總RNA,通過RT-PCR擴增得到Krt7編碼序列,構建重組質粒pcDNA3-Krt7-HA.經脂質體轉染NIH 3T3細胞,採用Western blot檢測Krt7錶達,免疫熒光檢測其在細胞中的錶達、定位以及在過氧化氫(H2O2)刺激下的變化情況.結果 重組質粒構建成功.Western blot顯示該質粒能夠在NIH 3T3細胞中有效錶達,免疫熒光檢測錶達產物主要分佈在細胞質中,隨著H2O2刺激時間的增加細胞內顆粒狀蛋白聚集物的形成愈髮明顯且在60min處髮生入覈現象.MEK通路抑製劑PD98059可明顯抑製這一過程.結論 成功構建瞭帶HA標籤的Krt7真覈錶達載體,該載體能在哺乳動物細胞中有效錶達併正確定位,H2O2誘導Krt7在NIH 3T3細胞內的形態及定位變化依賴于MEK介導的信號通路.
목적 세포각단백7(Cytokeratin-7,Krt7)여종류발전이급염증반응밀절상관,양화응격재차과정중분연착중요적각색,문중지재통과구건소서Krt7적진핵표체재체,병관찰기재NIH 3T3세포중적표체、정위이급재양화응격반응하적변화정황.방법 제취C57/BL6소서폐조직적총RNA,통과RT-PCR확증득도Krt7편마서렬,구건중조질립pcDNA3-Krt7-HA.경지질체전염NIH 3T3세포,채용Western blot검측Krt7표체,면역형광검측기재세포중적표체、정위이급재과양화경(H2O2)자격하적변화정황.결과 중조질립구건성공.Western blot현시해질립능구재NIH 3T3세포중유효표체,면역형광검측표체산물주요분포재세포질중,수착H2O2자격시간적증가세포내과립상단백취집물적형성유발명현차재60min처발생입핵현상.MEK통로억제제PD98059가명현억제저일과정.결론 성공구건료대HA표첨적Krt7진핵표체재체,해재체능재포유동물세포중유효표체병정학정위,H2O2유도Krt7재NIH 3T3세포내적형태급정위변화의뢰우MEK개도적신호통로.
