CAJ | 학술논문

eSRK(S位点受体激酶胞外域)、SCR/SP11(S位点富含半胱氨酸蛋白-S位点蛋白11)和THL1(类硫氧还蛋白)是甘蓝自交不亲和性信号传导过程重要的3个元件.利用PCR技术获得两种甘蓝SCR2(class-Ⅱ)、eSRK2(class-Ⅱ)、THL1、SRKJ(class-I,SRK6激酶域)和eSRK28(class-I)的编码序列,并分别构建以pGBKT7为载体的SCR2、THL1的重组诱饵质粒和以pGADT7为载体的eSRK2、eSRK28、SRKJ的重组猎物质粒.利用酵母双杂交系统验证eSRK2-SCR2、eSRK28-SCR2、SRKJ-THL1的相互作用.重组质粒在宿主细胞中未产生毒性及自激活作用,表明重组表达载体构建成功;组合Y2HGold[pGBKT7-SCR2]×Y187[pGADT7-eSRK2]在三缺平板(SD/-Trp-Leu-His/x-α-gal/AbA,TDO/x/A)上生长出蓝色克隆,激活了报告基因AUR1-C、MEL1、HIS3;组合Y2HGold[pGBKT7-SCR2]×Y187[pGADT7-eSRK28]能够在二缺平板(SD/-Trp-Leu)上生长,但在三缺平板上不生长,表明不同单倍型SRK-SCR可能不发生相互作用;组合Y187[pGADT7-SRKJ]×Y2HGold[pGBKT7-THL1]能够在四缺平板上生长,激活了4种报告基因(AUR1-C、MEL1、HIS3、ADE2).相同的单倍型SRK与SCR之间能够相互作用,不同的单倍型之间不会发生相互作用;酵母中报告基因表达的数目和类型的差异反映了class-Ⅱ型内部的SCR-SRK和class-I的SCR-SRK互作强度,I型高于Ⅱ型;THL与SRK之间存在较高的互作强度.这为I型和Ⅱ型不同的自交不亲和性表型所依赖的3个起始信号传导元件之间的识别程度差异提供了直接证据和新内容.
eSRK(S위점수체격매포외역)、SCR/SP11(S위점부함반광안산단백-S위점단백11)화THL1(류류양환단백)시감람자교불친화성신호전도과정중요적3개원건.이용PCR기술획득량충감람SCR2(class-Ⅱ)、eSRK2(class-Ⅱ)、THL1、SRKJ(class-I,SRK6격매역)화eSRK28(class-I)적편마서렬,병분별구건이pGBKT7위재체적SCR2、THL1적중조유이질립화이pGADT7위재체적eSRK2、eSRK28、SRKJ적중조작물질립.이용효모쌍잡교계통험증eSRK2-SCR2、eSRK28-SCR2、SRKJ-THL1적상호작용.중조질립재숙주세포중미산생독성급자격활작용,표명중조표체재체구건성공;조합Y2HGold[pGBKT7-SCR2]×Y187[pGADT7-eSRK2]재삼결평판(SD/-Trp-Leu-His/x-α-gal/AbA,TDO/x/A)상생장출람색극륭,격활료보고기인AUR1-C、MEL1、HIS3;조합Y2HGold[pGBKT7-SCR2]×Y187[pGADT7-eSRK28]능구재이결평판(SD/-Trp-Leu)상생장,단재삼결평판상불생장,표명불동단배형SRK-SCR가능불발생상호작용;조합Y187[pGADT7-SRKJ]×Y2HGold[pGBKT7-THL1]능구재사결평판상생장,격활료4충보고기인(AUR1-C、MEL1、HIS3、ADE2).상동적단배형SRK여SCR지간능구상호작용,불동적단배형지간불회발생상호작용;효모중보고기인표체적수목화류형적차이반영료class-Ⅱ형내부적SCR-SRK화class-I적SCR-SRK호작강도,I형고우Ⅱ형;THL여SRK지간존재교고적호작강도.저위I형화Ⅱ형불동적자교불친화성표형소의뢰적3개기시신호전도원건지간적식별정도차이제공료직접증거화신내용.