中国实验方剂学杂志
中國實驗方劑學雜誌
중국실험방제학잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL TRADITIONAL MEDICAL FORMULAE
2014年
10期
94-98
,共5页
靳保龙%崔光红%党伯岳%刘世会%漆小泉
靳保龍%崔光紅%黨伯嶽%劉世會%漆小泉
근보룡%최광홍%당백악%류세회%칠소천
丹参%原核表达%正交试验%纯化
丹參%原覈錶達%正交試驗%純化
단삼%원핵표체%정교시험%순화
Salvia miltiorrhiza%prokaryotic expression%orthogonal experiment%purifying
目的:优化丹参柯巴基焦磷酸合酶基因家族新基因CPS4的原核表达体系并对重组蛋白进行纯化.方法:对2种原核表达菌株进行比较.对诱导条件,包括异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导浓度、诱导时宿主菌的密度(A600)和诱导时间进行正交试验.利用HisTrap HP蛋白纯化柱对重组蛋白进行纯化.结果:Escherichia coli Tuner (DE3)表达菌株能诱导产生更多的可溶重组蛋白.最佳诱导表达条件为诱导时宿主菌的A600值0.7,IPTG浓度0.2 mmol·L-1,诱导表达时间10 h.HisTrap HP蛋白纯化柱纯化时梯度洗脱能得到纯度高的重组蛋白.结论:利用此优化体系可得到足量用于后续研究的重组蛋白,为其他二萜类合酶基因的原核表达提供参考.
目的:優化丹參柯巴基焦燐痠閤酶基因傢族新基因CPS4的原覈錶達體繫併對重組蛋白進行純化.方法:對2種原覈錶達菌株進行比較.對誘導條件,包括異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導濃度、誘導時宿主菌的密度(A600)和誘導時間進行正交試驗.利用HisTrap HP蛋白純化柱對重組蛋白進行純化.結果:Escherichia coli Tuner (DE3)錶達菌株能誘導產生更多的可溶重組蛋白.最佳誘導錶達條件為誘導時宿主菌的A600值0.7,IPTG濃度0.2 mmol·L-1,誘導錶達時間10 h.HisTrap HP蛋白純化柱純化時梯度洗脫能得到純度高的重組蛋白.結論:利用此優化體繫可得到足量用于後續研究的重組蛋白,為其他二萜類閤酶基因的原覈錶達提供參攷.
목적:우화단삼가파기초린산합매기인가족신기인CPS4적원핵표체체계병대중조단백진행순화.방법:대2충원핵표체균주진행비교.대유도조건,포괄이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도농도、유도시숙주균적밀도(A600)화유도시간진행정교시험.이용HisTrap HP단백순화주대중조단백진행순화.결과:Escherichia coli Tuner (DE3)표체균주능유도산생경다적가용중조단백.최가유도표체조건위유도시숙주균적A600치0.7,IPTG농도0.2 mmol·L-1,유도표체시간10 h.HisTrap HP단백순화주순화시제도세탈능득도순도고적중조단백.결론:이용차우화체계가득도족량용우후속연구적중조단백,위기타이첩류합매기인적원핵표체제공삼고.