江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
6期
49-52
,共4页
杨杰%杨子仪%徐亚莉%张源%郑铁松%陆长梅
楊傑%楊子儀%徐亞莉%張源%鄭鐵鬆%陸長梅
양걸%양자의%서아리%장원%정철송%륙장매
美洲商陆%遗传转化体系%外植体%不定芽%抗生素%筛选
美洲商陸%遺傳轉化體繫%外植體%不定芽%抗生素%篩選
미주상륙%유전전화체계%외식체%불정아%항생소%사선
在已构建高频再生体系的基础上,研究构建美洲商陆遗传转化体系的条件.结果表明:250 mg/L头孢霉素既能有效抑制根癌农杆菌的增殖,且对不定芽分化影响相对较小；美洲商陆对潮霉素高度敏感.美洲商陆的遗传转化过程为:无菌苗上部经增粗培养后,取茎节在不定芽分化培养基(ABDM)中预培养5d,在D600nm为0.6的菌液中侵染3 ～5 min,再转接到ABDM中黑暗、26℃共培养3d；然后外植体经冲洗后转接至含250 mg/L头孢霉素的ABDM中进行脱菌、分化以及不定芽伸长培养；待不定芽长至2 cm以上时,截取并转接到含3 mg/L潮霉素的生根培养基中进行抗性芽筛选,筛选出的抗潮霉素植株再经GFP显色、PCR、分子杂交等方法进一步阳性确认.
在已構建高頻再生體繫的基礎上,研究構建美洲商陸遺傳轉化體繫的條件.結果錶明:250 mg/L頭孢黴素既能有效抑製根癌農桿菌的增殖,且對不定芽分化影響相對較小；美洲商陸對潮黴素高度敏感.美洲商陸的遺傳轉化過程為:無菌苗上部經增粗培養後,取莖節在不定芽分化培養基(ABDM)中預培養5d,在D600nm為0.6的菌液中侵染3 ～5 min,再轉接到ABDM中黑暗、26℃共培養3d；然後外植體經遲洗後轉接至含250 mg/L頭孢黴素的ABDM中進行脫菌、分化以及不定芽伸長培養；待不定芽長至2 cm以上時,截取併轉接到含3 mg/L潮黴素的生根培養基中進行抗性芽篩選,篩選齣的抗潮黴素植株再經GFP顯色、PCR、分子雜交等方法進一步暘性確認.
재이구건고빈재생체계적기출상,연구구건미주상륙유전전화체계적조건.결과표명:250 mg/L두포매소기능유효억제근암농간균적증식,차대불정아분화영향상대교소；미주상륙대조매소고도민감.미주상륙적유전전화과정위:무균묘상부경증조배양후,취경절재불정아분화배양기(ABDM)중예배양5d,재D600nm위0.6적균액중침염3 ～5 min,재전접도ABDM중흑암、26℃공배양3d；연후외식체경충세후전접지함250 mg/L두포매소적ABDM중진행탈균、분화이급불정아신장배양；대불정아장지2 cm이상시,절취병전접도함3 mg/L조매소적생근배양기중진행항성아사선,사선출적항조매소식주재경GFP현색、PCR、분자잡교등방법진일보양성학인.
