实用临床医药杂志
實用臨床醫藥雜誌
실용림상의약잡지
JOURNAL OF JIANGSU CLINICAL MEDICINE
2013年
16期
27-30
,共4页
金世光%李城%王大新%颜炜群
金世光%李城%王大新%顏煒群
금세광%리성%왕대신%안위군
rhuPAa-melittin%发酵%纯化
rhuPAa-melittin%髮酵%純化
rhuPAa-melittin%발효%순화
rhuPAa-melittin%fermentation%purification
目的 通过rhuPAa-melittin在80 L发酵罐中的发酵表达,优化发酵条件及改进适合大规模纯化的方法,获得纯化的目的蛋白.方法 采用实验制备的rhuPAa-melittin重组质粒,通过电转化法将rhuPAa-melittin-pPICZαC载体转入毕赤酵母(Pichia pastoris)中,用PCR法扩增和检测rhuPAa-melittin基因在毕赤酵母基因组中的整合.利用毕赤酵母进行小量发酵,摸索最佳表达时间、pH及最佳的纯化方法.通过rhuPAa-melittin在80 L发酵罐中的发酵表达,优化发酵条件及改进适合大规模纯化的方法.结果 rhuPAa-melittin发酵条件在温度为28℃～30℃,FM21培养基中添加0.5％的蛋白胨,甲醇最终的流加速度控制在9 mL/(h.L),初始发酵液体积、DO值(溶解氧)在25％～ 30％,发酵时间为12h,pH在6.0～7.0时获得高产量、高纯度、高收率的蛋白.结论 获得产量约350 mg/L,纯度可达96％以上,收率可达65％左右的rhuPAa-melittin蛋白.
目的 通過rhuPAa-melittin在80 L髮酵罐中的髮酵錶達,優化髮酵條件及改進適閤大規模純化的方法,穫得純化的目的蛋白.方法 採用實驗製備的rhuPAa-melittin重組質粒,通過電轉化法將rhuPAa-melittin-pPICZαC載體轉入畢赤酵母(Pichia pastoris)中,用PCR法擴增和檢測rhuPAa-melittin基因在畢赤酵母基因組中的整閤.利用畢赤酵母進行小量髮酵,摸索最佳錶達時間、pH及最佳的純化方法.通過rhuPAa-melittin在80 L髮酵罐中的髮酵錶達,優化髮酵條件及改進適閤大規模純化的方法.結果 rhuPAa-melittin髮酵條件在溫度為28℃～30℃,FM21培養基中添加0.5％的蛋白胨,甲醇最終的流加速度控製在9 mL/(h.L),初始髮酵液體積、DO值(溶解氧)在25％～ 30％,髮酵時間為12h,pH在6.0～7.0時穫得高產量、高純度、高收率的蛋白.結論 穫得產量約350 mg/L,純度可達96％以上,收率可達65％左右的rhuPAa-melittin蛋白.
목적 통과rhuPAa-melittin재80 L발효관중적발효표체,우화발효조건급개진괄합대규모순화적방법,획득순화적목적단백.방법 채용실험제비적rhuPAa-melittin중조질립,통과전전화법장rhuPAa-melittin-pPICZαC재체전입필적효모(Pichia pastoris)중,용PCR법확증화검측rhuPAa-melittin기인재필적효모기인조중적정합.이용필적효모진행소량발효,모색최가표체시간、pH급최가적순화방법.통과rhuPAa-melittin재80 L발효관중적발효표체,우화발효조건급개진괄합대규모순화적방법.결과 rhuPAa-melittin발효조건재온도위28℃～30℃,FM21배양기중첨가0.5％적단백동,갑순최종적류가속도공제재9 mL/(h.L),초시발효액체적、DO치(용해양)재25％～ 30％,발효시간위12h,pH재6.0～7.0시획득고산량、고순도、고수솔적단백.결론 획득산량약350 mg/L,순도가체96％이상,수솔가체65％좌우적rhuPAa-melittin단백.
