中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2013年
8期
803-807
,共5页
张瑞芹%汤建中%赵志军%贾伟%魏军%张一琳%张兆波%徐广贤
張瑞芹%湯建中%趙誌軍%賈偉%魏軍%張一琳%張兆波%徐廣賢
장서근%탕건중%조지군%가위%위군%장일림%장조파%서엄현
结核分枝杆菌%ppe37蛋白%RAW264.7巨噬细胞
結覈分枝桿菌%ppe37蛋白%RAW264.7巨噬細胞
결핵분지간균%ppe37단백%RAW264.7거서세포
Mycobacterium tuberculosis%ppe37 protein%RAW264.7 macrophage
目的 研究在结核分枝杆菌感染过程中,ppe37蛋白引起的巨噬细胞免疫应答反应.方法 利用本实验室已构建好的ppe37原核表达载体,将其转化到大肠杆菌E.col BL21中,用IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE与Western blot鉴定后,利用Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂金对重组蛋白进行纯化并复性.利用SDS-PAGE和AlpHaImager 2200软件对纯化蛋白进行鉴定与分析.分别用浓度为100 ng/ mL、500 ng/mL、5 000 ng/mL的重组ppe37蛋白刺激RAW264.7巨噬细胞,24 h、48 h、72 h后,用Real-time PCR检测RAW264.7巨噬细胞NFκB、TNF-α、IL-6 mRNA的表达量的变化.结果 SDSPAGE鉴定显示,重组ppe37蛋白获得了大量表达,其相对分子质量约为50 kDa.经Western Blot验证,重组ppe37蛋白可与抗His单抗发生特异性反应,经AlpHaImager 2200软件薄层扫描分析,重组蛋白的纯度为96.2％,并成功的进行了蛋白复性.浓度分别为100 ng/ mL,500 ng/ mL,5 000 ng/ mL的重组ppe37蛋白刺激巨噬细胞,24 h后Real-Time PCR检测结果显示与空白对照组相比NF-κB、TNF α mRNA的表达没有影响(P＞0.05),而IL-6 mRNA的表达上调(P＜0.05)；48 h、72 h后NF κB、TNF-α 、IL-6 mRNA的表达显著上调(P＜0.05).结论 成功地制备并纯化了重组ppe37蛋白,重组ppe37蛋白能够活化巨噬细胞,激活细胞免疫反应,并促使巨噬细胞发生炎性反应.
目的 研究在結覈分枝桿菌感染過程中,ppe37蛋白引起的巨噬細胞免疫應答反應.方法 利用本實驗室已構建好的ppe37原覈錶達載體,將其轉化到大腸桿菌E.col BL21中,用IPTG誘導錶達後,經SDS-PAGE與Western blot鑒定後,利用Ni-Agarose His標籤蛋白純化試劑金對重組蛋白進行純化併複性.利用SDS-PAGE和AlpHaImager 2200軟件對純化蛋白進行鑒定與分析.分彆用濃度為100 ng/ mL、500 ng/mL、5 000 ng/mL的重組ppe37蛋白刺激RAW264.7巨噬細胞,24 h、48 h、72 h後,用Real-time PCR檢測RAW264.7巨噬細胞NFκB、TNF-α、IL-6 mRNA的錶達量的變化.結果 SDSPAGE鑒定顯示,重組ppe37蛋白穫得瞭大量錶達,其相對分子質量約為50 kDa.經Western Blot驗證,重組ppe37蛋白可與抗His單抗髮生特異性反應,經AlpHaImager 2200軟件薄層掃描分析,重組蛋白的純度為96.2％,併成功的進行瞭蛋白複性.濃度分彆為100 ng/ mL,500 ng/ mL,5 000 ng/ mL的重組ppe37蛋白刺激巨噬細胞,24 h後Real-Time PCR檢測結果顯示與空白對照組相比NF-κB、TNF α mRNA的錶達沒有影響(P＞0.05),而IL-6 mRNA的錶達上調(P＜0.05)；48 h、72 h後NF κB、TNF-α 、IL-6 mRNA的錶達顯著上調(P＜0.05).結論 成功地製備併純化瞭重組ppe37蛋白,重組ppe37蛋白能夠活化巨噬細胞,激活細胞免疫反應,併促使巨噬細胞髮生炎性反應.
목적 연구재결핵분지간균감염과정중,ppe37단백인기적거서세포면역응답반응.방법 이용본실험실이구건호적ppe37원핵표체재체,장기전화도대장간균E.col BL21중,용IPTG유도표체후,경SDS-PAGE여Western blot감정후,이용Ni-Agarose His표첨단백순화시제금대중조단백진행순화병복성.이용SDS-PAGE화AlpHaImager 2200연건대순화단백진행감정여분석.분별용농도위100 ng/ mL、500 ng/mL、5 000 ng/mL적중조ppe37단백자격RAW264.7거서세포,24 h、48 h、72 h후,용Real-time PCR검측RAW264.7거서세포NFκB、TNF-α、IL-6 mRNA적표체량적변화.결과 SDSPAGE감정현시,중조ppe37단백획득료대량표체,기상대분자질량약위50 kDa.경Western Blot험증,중조ppe37단백가여항His단항발생특이성반응,경AlpHaImager 2200연건박층소묘분석,중조단백적순도위96.2％,병성공적진행료단백복성.농도분별위100 ng/ mL,500 ng/ mL,5 000 ng/ mL적중조ppe37단백자격거서세포,24 h후Real-Time PCR검측결과현시여공백대조조상비NF-κB、TNF α mRNA적표체몰유영향(P＞0.05),이IL-6 mRNA적표체상조(P＜0.05)；48 h、72 h후NF κB、TNF-α 、IL-6 mRNA적표체현저상조(P＜0.05).결론 성공지제비병순화료중조ppe37단백,중조ppe37단백능구활화거서세포,격활세포면역반응,병촉사거서세포발생염성반응.
