CAJ | 학술논문

目的通过构建结核分枝杆菌蛋白TB16.3的原核表达载体并表达纯化,对其检测抗体的性能进行评价.方法用PCR法从结核菌H37Rv基因组DNA扩增TB16.3基因,连接到表达载体PET-30a上,在大肠杆菌中表达:组氨酸标签镍柱层析纯化重组蛋白.结果建立ELISA方法检测116份TB患者和96份健康对照者血清中的抗结核菌TB16.3抗体.构建了表达TB16.3的大肠杆菌工程菌,发现目的蛋白主要以可溶形式存在.诱导剂IPTG浓度为1 mmol/L.37℃培养5h可获得最大量表达.而在28℃时重组蛋白为可溶形式表达.用重组TB16.3蛋白,ELISA方法检测118份TB患者和96份健康者血清,敏感性、特异性和调整一致率分别为72.9％、86.5％和79.6％.抗TB15.3抗体的敏感性、特异性和调整一致率分别为46.6％、99.0％和76.0％.抗CFP-10的敏感性、特异性和调整一致率分别为75.4％、55.2％和65.7％.结核病患者抗Rv2626C抗体阳性率(44.1％)显著低于其在正常对照的阳性率(75.0％,x2=20.8,P＜0.01).TB15.3和TB16.3等量包被检测,敏感性、特异性和一致率分别达69.4％、96.9％和83.7％,检测非TB肺部疾病患者,其抗体阳性率仅为9.6％,特异性为90.4％.TB15.3和TB16.3混合后同时包被检测,结合TB15.3单独检测的结果,则敏感性、特异性和一致率分别达82.2％、95.9％和88.9％,一致率为最高.结论目的基因克隆入宿主菌中并表达成功,获得制备上述4种蛋白的最适条件.获得的重组TB16.3、CFP 10和TB15.3蛋白可能成为结核病血清学诊断的抗原或者抗原组合.Rv2626C抗体可能被用于结核患者恢复期的评估.
목적 통과구건결핵분지간균단백TB16.3적원핵표체재체병표체순화,대기검측항체적성능진행평개.방법용PCR법종결핵균H37Rv기인조DNA확증TB16.3기인,련접도표체재체PET-30a상,재대장간균중표체:조안산표첨얼주층석순화중조단백.결과 건립ELISA방법검측116빈TB환자화96빈건강대조자혈청중적항결핵균TB16.3항체.구건료표체TB16.3적대장간균공정균,발현목적단백주요이가용형식존재.유도제IPTG농도위1 mmol/L.37℃배양5h가획득최대량표체.이재28℃시중조단백위가용형식표체.용중조TB16.3단백,ELISA방법검측118빈TB환자화96빈건강자혈청,민감성、특이성화조정일치솔분별위72.9％、86.5％화79.6％.항TB15.3항체적민감성、특이성화조정일치솔분별위46.6％、99.0％화76.0％.항CFP-10적민감성、특이성화조정일치솔분별위75.4％、55.2％화65.7％.결핵병환자항Rv2626C항체양성솔(44.1％)현저저우기재정상대조적양성솔(75.0％,x2=20.8,P＜0.01).TB15.3화TB16.3등량포피검측,민감성、특이성화일치솔분별체69.4％、96.9％화83.7％,검측비TB폐부질병환자,기항체양성솔부위9.6％,특이성위90.4％.TB15.3화TB16.3혼합후동시포피검측,결합TB15.3단독검측적결과,칙민감성、특이성화일치솔분별체82.2％、95.9％화88.9％,일치솔위최고.결론 목적기인극륭입숙주균중병표체성공,획득제비상술4충단백적최괄조건.획득적중조TB16.3、CFP 10화TB15.3단백가능성위결핵병혈청학진단적항원혹자항원조합.Rv2626C항체가능피용우결핵환자회복기적평고.