中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2013年
8期
780-784
,共5页
李武%邓光存%刘晓明%王玉炯
李武%鄧光存%劉曉明%王玉炯
리무%산광존%류효명%왕옥형
结核分枝杆菌%Ag85A%Ag85B%共表达%Western blot
結覈分枝桿菌%Ag85A%Ag85B%共錶達%Western blot
결핵분지간균%Ag85A%Ag85B%공표체%Western blot
Mycobacterium tuberculosis%Ag85A%Ag85B%co-expression%Western blot
目的 Ag85A和Ag85B是结核分枝杆菌的主要优势保护抗原,为提高编码Ag85A和Ag85B DNA疫苗的免疫原性和免疫效果,特构建真核共表达Ag85A和Ag85B抗原的真核表达载体pcDNA-Ag85A IRES-Ag85B,并利用293T细胞对其表达进行检测.方法 PCR扩增Ag85A和Ag85B基因,逐步将Ag85A和Ag85B基因定向插入至质粒pcDNA3.1(+)多克隆位点CMV启动子与加A信号BGH poly(A)之间,并将Ag85A和Ag85B基因以内部核糖体进入位点(internal ribo some entry site,IRES)序列连接,酶切和测序验证后将重组质粒转染至293T细胞中进行真核表达,48 h后提取细胞总蛋白,表达产物经SDS-PAGE分离和Western blot分析.结果 限制性内切酶酶切及测序结果表明,重组质粒pcDNA-Ag85AIRES-Ag85B基因序列和阅读框架正确.将重组质粒转入293T细胞后,利用Ag85A和Ag85B特异性抗体Western blot检测证实两种抗原可在同一载体中各自独立表达.结论 成功构建了能够同时独立表达结核分枝杆菌Ag85A和Ag85B抗原基因的真核表达载体pcDNA-Ag85A IRES-Ag85B,为下一步研究它们的免疫原性和免疫效果奠定了基础.
目的 Ag85A和Ag85B是結覈分枝桿菌的主要優勢保護抗原,為提高編碼Ag85A和Ag85B DNA疫苗的免疫原性和免疫效果,特構建真覈共錶達Ag85A和Ag85B抗原的真覈錶達載體pcDNA-Ag85A IRES-Ag85B,併利用293T細胞對其錶達進行檢測.方法 PCR擴增Ag85A和Ag85B基因,逐步將Ag85A和Ag85B基因定嚮插入至質粒pcDNA3.1(+)多剋隆位點CMV啟動子與加A信號BGH poly(A)之間,併將Ag85A和Ag85B基因以內部覈糖體進入位點(internal ribo some entry site,IRES)序列連接,酶切和測序驗證後將重組質粒轉染至293T細胞中進行真覈錶達,48 h後提取細胞總蛋白,錶達產物經SDS-PAGE分離和Western blot分析.結果 限製性內切酶酶切及測序結果錶明,重組質粒pcDNA-Ag85AIRES-Ag85B基因序列和閱讀框架正確.將重組質粒轉入293T細胞後,利用Ag85A和Ag85B特異性抗體Western blot檢測證實兩種抗原可在同一載體中各自獨立錶達.結論 成功構建瞭能夠同時獨立錶達結覈分枝桿菌Ag85A和Ag85B抗原基因的真覈錶達載體pcDNA-Ag85A IRES-Ag85B,為下一步研究它們的免疫原性和免疫效果奠定瞭基礎.
목적 Ag85A화Ag85B시결핵분지간균적주요우세보호항원,위제고편마Ag85A화Ag85B DNA역묘적면역원성화면역효과,특구건진핵공표체Ag85A화Ag85B항원적진핵표체재체pcDNA-Ag85A IRES-Ag85B,병이용293T세포대기표체진행검측.방법 PCR확증Ag85A화Ag85B기인,축보장Ag85A화Ag85B기인정향삽입지질립pcDNA3.1(+)다극륭위점CMV계동자여가A신호BGH poly(A)지간,병장Ag85A화Ag85B기인이내부핵당체진입위점(internal ribo some entry site,IRES)서렬련접,매절화측서험증후장중조질립전염지293T세포중진행진핵표체,48 h후제취세포총단백,표체산물경SDS-PAGE분리화Western blot분석.결과 한제성내절매매절급측서결과표명,중조질립pcDNA-Ag85AIRES-Ag85B기인서렬화열독광가정학.장중조질립전입293T세포후,이용Ag85A화Ag85B특이성항체Western blot검측증실량충항원가재동일재체중각자독립표체.결론 성공구건료능구동시독립표체결핵분지간균Ag85A화Ag85B항원기인적진핵표체재체pcDNA-Ag85A IRES-Ag85B,위하일보연구타문적면역원성화면역효과전정료기출.
