中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2013年
8期
757-761
,共5页
王涛%郑玉玲%袁媛%江华%郝淮杰%李雪琴%姜永强
王濤%鄭玉玲%袁媛%江華%郝淮傑%李雪琴%薑永彊
왕도%정옥령%원원%강화%학회걸%리설금%강영강
猪链球菌%SSU05_1000%紧密连接
豬鏈毬菌%SSU05_1000%緊密連接
저련구균%SSU05_1000%긴밀련접
Streptococcus suis%SSU05_1000%tight junction
目的 构建猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_1000基因的重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,并研究其对细胞间紧密连接的调控作用.方法 以05ZYH33基因组为模板设计引物,构建pET30a-SSU05_1000重组表达质粒,转化到大肠杆菌中诱导表达,用镍亲和层析的方法对目的蛋白进行纯化,Western blot检测其对人脑微血管内皮细胞紧密连接的调控.结果 构建的SSU05_1000重组表达质粒能够在大肠杆菌中高效表达,纯化的SSU05_1000蛋白纯度达90％以上,Western blot结果显示其与人脑微血管内皮细胞(hCMEC/D3)相互作用后,可以下调细胞间紧密连接蛋白Claudin-5的表达.结论 SSU05_1000蛋白能够破坏人脑微血管内皮细胞的紧密连接结构,提示其在猪链球菌穿血脑屏障(BBB,bloodbrain barrier)过程中起重要作用.
目的 構建豬鏈毬菌細胞壁蛋白SSU05_1000基因的重組錶達質粒,在大腸桿菌BL21(DE3)中高效錶達,併研究其對細胞間緊密連接的調控作用.方法 以05ZYH33基因組為模闆設計引物,構建pET30a-SSU05_1000重組錶達質粒,轉化到大腸桿菌中誘導錶達,用鎳親和層析的方法對目的蛋白進行純化,Western blot檢測其對人腦微血管內皮細胞緊密連接的調控.結果 構建的SSU05_1000重組錶達質粒能夠在大腸桿菌中高效錶達,純化的SSU05_1000蛋白純度達90％以上,Western blot結果顯示其與人腦微血管內皮細胞(hCMEC/D3)相互作用後,可以下調細胞間緊密連接蛋白Claudin-5的錶達.結論 SSU05_1000蛋白能夠破壞人腦微血管內皮細胞的緊密連接結構,提示其在豬鏈毬菌穿血腦屏障(BBB,bloodbrain barrier)過程中起重要作用.
목적 구건저련구균세포벽단백SSU05_1000기인적중조표체질립,재대장간균BL21(DE3)중고효표체,병연구기대세포간긴밀련접적조공작용.방법 이05ZYH33기인조위모판설계인물,구건pET30a-SSU05_1000중조표체질립,전화도대장간균중유도표체,용얼친화층석적방법대목적단백진행순화,Western blot검측기대인뇌미혈관내피세포긴밀련접적조공.결과 구건적SSU05_1000중조표체질립능구재대장간균중고효표체,순화적SSU05_1000단백순도체90％이상,Western blot결과현시기여인뇌미혈관내피세포(hCMEC/D3)상호작용후,가이하조세포간긴밀련접단백Claudin-5적표체.결론 SSU05_1000단백능구파배인뇌미혈관내피세포적긴밀련접결구,제시기재저련구균천혈뇌병장(BBB,bloodbrain barrier)과정중기중요작용.
