分析测试学报
分析測試學報
분석측시학보
JOURNAL OF INSTRUMENTAL ANALYSIS
2013年
8期
968-972
,共5页
孙悦%莫满芳%戴卫平%张玉英%梁楚婷%王淑美
孫悅%莫滿芳%戴衛平%張玉英%樑楚婷%王淑美
손열%막만방%대위평%장옥영%량초정%왕숙미
微流控芯片%活性氧%细胞凋亡
微流控芯片%活性氧%細胞凋亡
미류공심편%활성양%세포조망
microfluidic chip%reactive oxygen species(ROS)%apoptosis
建立了微流控芯片毛细管电泳激光诱导荧光同时测定细胞内活性氧和凋亡信号的方法.先用Alexa Fluor(@) 488 annexin V细胞凋亡试剂盒标记细胞凋亡的外翻磷脂酰丝氨酸,再用双氢罗丹明123(DHR123)标记细胞内活性氧,用PBS将细胞调整为终密度1.2×106 cells/mL的细胞悬液.细胞群经反复冻融法破碎后,以20 mmol/L硼砂(pH 9.2)作电泳缓冲溶液,分离电压1.2 kV,进样时间60s,1 min内可完成活性氧和细胞凋亡信号的同时测定.方法简单、快速,细胞内活性氧和DHR123的反应产物(Rh123)在0.5～3 μmol/L浓度范围内线性关系良好,相关系数(r)为0.998,检出限(S/N=3)为0.058 μmoL/L,可用于细胞内活性氧的定量分析.测得HepG2肝癌细胞活性氧含量为0.16 μmol/L,被阿霉素诱导凋亡后,细胞内活性氧含量升高至1.77 μmol/L.
建立瞭微流控芯片毛細管電泳激光誘導熒光同時測定細胞內活性氧和凋亡信號的方法.先用Alexa Fluor(@) 488 annexin V細胞凋亡試劑盒標記細胞凋亡的外翻燐脂酰絲氨痠,再用雙氫囉丹明123(DHR123)標記細胞內活性氧,用PBS將細胞調整為終密度1.2×106 cells/mL的細胞懸液.細胞群經反複凍融法破碎後,以20 mmol/L硼砂(pH 9.2)作電泳緩遲溶液,分離電壓1.2 kV,進樣時間60s,1 min內可完成活性氧和細胞凋亡信號的同時測定.方法簡單、快速,細胞內活性氧和DHR123的反應產物(Rh123)在0.5～3 μmol/L濃度範圍內線性關繫良好,相關繫數(r)為0.998,檢齣限(S/N=3)為0.058 μmoL/L,可用于細胞內活性氧的定量分析.測得HepG2肝癌細胞活性氧含量為0.16 μmol/L,被阿黴素誘導凋亡後,細胞內活性氧含量升高至1.77 μmol/L.
건립료미류공심편모세관전영격광유도형광동시측정세포내활성양화조망신호적방법.선용Alexa Fluor(@) 488 annexin V세포조망시제합표기세포조망적외번린지선사안산,재용쌍경라단명123(DHR123)표기세포내활성양,용PBS장세포조정위종밀도1.2×106 cells/mL적세포현액.세포군경반복동융법파쇄후,이20 mmol/L붕사(pH 9.2)작전영완충용액,분리전압1.2 kV,진양시간60s,1 min내가완성활성양화세포조망신호적동시측정.방법간단、쾌속,세포내활성양화DHR123적반응산물(Rh123)재0.5～3 μmol/L농도범위내선성관계량호,상관계수(r)위0.998,검출한(S/N=3)위0.058 μmoL/L,가용우세포내활성양적정량분석.측득HepG2간암세포활성양함량위0.16 μmol/L,피아매소유도조망후,세포내활성양함량승고지1.77 μmol/L.
